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染色質(zhì)免疫共沉淀（ChIP）實(shí)驗(yàn)
（二）、除雜及抗體哺育。8,、超聲破碎結(jié)束后,，10,，000g4oC離心10min,。去除不溶物質(zhì),。留取300ul做實(shí)驗(yàn),，其余保存于-80oC,。300ul中，100ul加抗體做為實(shí)驗(yàn)組,；100ul不加抗體做為對(duì)照組,；100ul加入4ul5MNaCl（NaCl終濃度為0.2M），65oC處理3h解交聯(lián),，跑電泳,，檢測(cè)超聲破碎的效果。9,、在100ul的超聲破碎產(chǎn)物中,，加入900ulChIPDilutionBuffer和20ul的50×PIC。再各加入60ulProteinAAgarose/SalmonSpe -
熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization,FISH）（圖）
實(shí)驗(yàn)原理熒光原位雜交（FluorescenceinsituhybridizationFISH）是一門(mén)新興的分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù),，是20世紀(jì)80年代末期在原有的放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種非放射性原位雜交技術(shù),。目前這項(xiàng)技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于動(dòng)植物基因組結(jié)構(gòu)研究、染色體精細(xì)結(jié)構(gòu)變異分析,、病毒感染分析,、人類產(chǎn)前診斷、腫瘤遺傳學(xué)和基因組進(jìn)化研究待許多領(lǐng)域,。FISH的基本原理是用已知的標(biāo)記單鏈核酸為探針,，按照堿基互補(bǔ)的原則,，與待檢材料中未知的單鏈核酸進(jìn)行異性結(jié)合，形成可被檢測(cè)的雜交雙鏈核酸,。由于DN -
凝膠遷移實(shí)驗(yàn)系列二-實(shí)驗(yàn)操作方法
1.探針的標(biāo)記：（1）如下設(shè)置探針標(biāo)記的反應(yīng)體系：待標(biāo)記探針（1.75pmol/微升）2微升T4PolynucleotideKinaseBuffer（10X）1微升Nuclease-FreeWater5微升[γ-32P]ATP（3,000Ci/mmolat10mCi/ml）1微升T4PolynucleotideKinase（5-10U/微升）1微升總體積10微升按照上述反應(yīng)體系依次加入各種試劑,，加入同位素后，Vortex混勻,，再加入T4PolynucleotideKinase,，混勻。（2）使用水 -
一,、原理質(zhì)粒DNA粘附在細(xì)菌細(xì)胞表面,，經(jīng)過(guò)42°C短時(shí)間的熱擊處理，促進(jìn)吸收DNA.然后在非選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)一代,，待質(zhì)粒上所帶的抗菌素基因表達(dá),，就可以在含抗菌素的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。二,、器材旋渦混合器,，微量移液取樣器，移液器吸頭,，1.5ml微量離心管,，雙面微量離心管架，干式恒溫氣?。ɑ蚝銣厮″仯?，制冰機(jī)，恒溫?fù)u床,，培養(yǎng)皿（已鋪好固體LB-Amp）,，超凈工作臺(tái)，酒精燈,，玻璃涂棒,，恒溫培養(yǎng)箱。三,、試劑培養(yǎng)基（不加抗菌素），LB培養(yǎng)基（加抗菌素）,，無(wú)菌ddH2O,IPTG,X-gal.四,、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備無(wú)菌dd
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一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c原理質(zhì)粒多為一些雙鏈,、環(huán)狀的DNA分子,，是獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外進(jìn)行復(fù)制和遺傳的輔助性遺傳單位。質(zhì)粒是進(jìn)行分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)操作,，進(jìn)行遺傳工程改良物種等工作時(shí)zui主要的DNA載體,。提取質(zhì)粒的基本步驟分為三步：①細(xì)菌的培養(yǎng)和質(zhì)粒的擴(kuò)增②細(xì)菌菌體的裂解③質(zhì)粒DNA的純化本實(shí)驗(yàn)采取的菌體裂解方法為堿解法，質(zhì)粒純化方法為梯度離心法。二,、材料與試劑1,、材料：大腸桿菌2、儀器：超凈工作臺(tái),，培養(yǎng)箱,，搖床，恒溫水浴鍋,，臺(tái)式離心機(jī),，取液器一套，低溫冰箱,，冷凍真空干燥機(jī),，電泳儀，水平電泳槽,，紫外觀測(cè)儀3,、
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ATCC:食品中大腸菌群,、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗(yàn)方法
1主題內(nèi)容與適用范圍本文規(guī)定了食品中大腸菌群,、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗(yàn)方法。本文適用于航空食品的檢驗(yàn),。2設(shè)備和材料吸管（1ml,、10ml）、恒溫培養(yǎng)箱（36±1℃,、44.5±0.5℃）,、冰箱、均質(zhì)器,、振蕩器,、平皿、稀釋瓶,、天平,、顯微鏡等3培養(yǎng)基和試劑月桂基硫酸鹽胰蛋白月示（LST）肉湯、煌綠乳糖膽鹽（BGLB）肉湯,、EC肉湯,、伊紅美藍(lán)瓊脂（EMB）、營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面,、色氨酸肉湯,、MR-PV培養(yǎng)基、Korser氏枸掾酸鹽肉湯,、結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）,、Butterfield氏磷酸鹽緩沖稀釋液,、 -
ATCC專題：實(shí)驗(yàn)室消毒滅菌技術(shù)
嚴(yán)格的消毒滅菌對(duì)細(xì)胞與胚胎工程研究與應(yīng)用工作極為重要,，直接影響著整個(gè)實(shí)驗(yàn)?zāi)芊耥樌M(jìn)行,。（一）消毒滅菌方法目前常用的消毒滅菌方法多采用物理方法（如干熱滅菌法、濕熱滅菌法,、過(guò)濾除菌法,、射線殺菌法等）和化學(xué)方法（消毒劑、抗生素）兩大類,。1．干熱滅菌法是利用恒溫干燥箱內(nèi)120oC～150oC的高熱,，并保持90～120分鐘，殺死細(xì)菌和芽孢,，達(dá)到滅菌目的的一種方法,。主要適用于不便在壓力蒸汽滅菌器中進(jìn)行滅菌，且不易被高溫?fù)p壞的玻璃器皿,、金屬器械以及不能和蒸汽接觸的物品的滅菌,。用此方法滅菌的物品干燥，易于貯存,。 -
實(shí)驗(yàn)試劑BacteriumpreparationCryoprotectiveagentTrueCoolTMcryovial實(shí)驗(yàn)設(shè)備CoolBoxTMCFT30ice-freecoolingstationCoolRack®CFT30CoolRack®CFCryolabelsand/orcryomarkersThermalTrayHPplatform（optional）CoolSinkTMBX50（optional）37°Cwaterbath-80°CFreezer實(shí)驗(yàn)步驟1.BacteriaPre
