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1 主題內容與適用范圍
本文規(guī)定了食品中大腸菌群,、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法,。
本文適用于航空食品的檢驗,。
2 設備和材料
吸管（1ml,、10ml）、恒溫培養(yǎng)箱（36±1℃,、44.5±0.5℃）,、冰箱、均質器,、振蕩器、平皿,、稀釋瓶,、天平、顯微鏡等
3 培養(yǎng)基和試劑
月桂基硫酸鹽胰蛋白月示（LST）肉湯,、煌綠乳糖膽鹽（BGLB）肉湯,、EC肉湯、伊紅美藍瓊脂（EMB）,、營養(yǎng)瓊脂斜面,、色氨酸肉湯、MR-PV培養(yǎng)基,、Korser氏枸掾酸鹽肉湯,、結晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）、Butterfield氏磷酸鹽緩沖稀釋液,、生理鹽水,、革蘭氏染色液、Kovacs氏靛基質試劑,、甲基紅指示劑,、Voges-proskauer（V-P）試劑、
4 樣品制備
4.1 以無菌操作取有代表性的樣品盛于滅菌容器內,。如有包裝,，則用75%乙醇在包裝開口處擦拭后取樣。
4.2 制備樣品勻液
以無菌操作取25g樣品,，放入裝有225ml稀釋劑的滅菌均質杯內,，于8000r/min均質1-2min，制成1：10的樣品勻液,。如樣品均質時間超過2min,，應在均質杯外加冰水冷卻。
4.3 稀釋樣品勻液
用10ml滅菌吸管準確吸取1：10的樣品勻液10ml,，放入裝有90ml稀釋劑的150ml稀釋瓶中,。迅速振搖，將樣品混勻,，制成1：100的樣品勻液,。
5 大腸菌群的測定
5.1 大腸菌群MPN值的測定
5.1.1 對每個樣品，選擇適宜的三個連續(xù)稀釋度的樣品稀釋液。每個稀釋度接種三管月桂基硫酸鹽胰蛋白月示（LST）肉湯,，每管接種1ml,。
5.1.2 將接種管置于36±1℃的培養(yǎng)48±2h。
5.1.3 觀察試管的產氣情況：檢查倒管內是否有氣泡產生,，記錄在24h和48h內產氣的LST肉湯管數(shù),。如所有LST肉湯管均未產氣，則可報告為大腸菌群陰性,；如有產氣者,，則進一步作證實試驗。
5.2 大腸菌群的證實試驗
5.2.1 將所有產氣管用直徑為3mm的接種環(huán)移種到煌綠乳糖膽鹽（BGLB）肉湯管中,。
5.2.2 置BGLB肉湯管于36±1℃的培養(yǎng)48±2h,。
5.2.3 記錄所有BGLB肉湯管的產氣管數(shù)。
5.2.4 結果報告：按BGLB肉湯產氣管數(shù),，查MPN表報告每克（毫升）樣品中大腸菌群的MPN值,。
6 糞大腸菌群測定
6.1 用接種環(huán)將所有48±2h內產氣的LST肉湯管培養(yǎng)物移種于EC肉湯管中。
6.2 將所有接種的EC肉湯管在30min內放入44.5±0.5℃水浴箱內,，培養(yǎng)24±2h,。水浴箱的水平面應高于肉湯培養(yǎng)基液面。應以已知為44.5℃產氣陽性的大腸桿菌和44.5℃不產氣的產氣腸桿菌或其他大腸菌群細菌作陽性和陰性對照,。
6.3 記錄EC肉湯管的產氣情況,。產氣管為糞大腸菌群試驗陽性；不產氣管為糞大腸菌群試驗陰性,。
6.4 結果報告：按產氣管數(shù),，查MPN表報告每克（毫升）樣品中糞大腸菌群的MPN值。
7 大腸桿菌測定
7.1 將6.3條中的EC肉湯管繼續(xù)培養(yǎng)24h取其產氣管的培養(yǎng)物劃線接種于伊紅美藍（EMB）平板,，36±1℃的培養(yǎng)24±2h,。
7.2 檢查平板上有無具黑色中心有光澤或無光澤的典型菌落。
7.3 如有典型菌落,，則從每個平板上至少挑取2個典型菌落,；如無典型菌落，則從每個平板上至少挑取2個可疑菌落,。用接種針接觸菌落中心部位,，移種到營養(yǎng)瓊脂斜面上，36±1℃的培養(yǎng)18-24h,。
7.4 將斜面培養(yǎng)物移種到下列培養(yǎng)基進行生化試驗,。
7.4.1 色氨酸肉湯：在36±1℃的培養(yǎng)24±2h后，加Kovacs氏試劑0.2-0.3ml,，上層出現(xiàn)紅色為靛基質陽性反應,。
7.4.2 MR-VP培養(yǎng)基：在36±1℃的培養(yǎng)48±2h后,。以無菌操作移取培養(yǎng)物1ml至13mm*100mm試管中，加5%萘酚乙醇溶液0.6ml,，40%氫氧化鉀溶液0.2ml和少許肌酸結晶,，振搖試管后靜置2h，如出現(xiàn)伊紅色,，為VP試驗陽性,。
將 MR-VP培養(yǎng)物的剩余部分再培養(yǎng)48h滴加5滴甲基紅溶液。如培養(yǎng)物變紅色,，為甲基紅試驗陽性,，若變黃色則為陰性反應。
7.4.3 Korser氏枸掾酸鹽肉湯：于36±1℃的培養(yǎng)96h記錄有無生長,。
7.4.4 LST肉湯：于36±1℃的培養(yǎng)48±2h，觀察試管中是否產氣,。
7.4.5 革蘭氏染色：取18h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物作革蘭氏染色,。大腸桿菌為革蘭氏陰性。
7.4.6 大腸桿菌與非大腸桿菌生化鑒別如下
如出現(xiàn)上表以外的生化反應類型,，表明培養(yǎng)物可能不純,，應重新劃線分離，必要時做重復試驗,。
7.5 結果報告：大腸桿菌為革蘭氏陰性無芽孢桿菌,，發(fā)酵乳糖產酸產氣，IMViC試驗為++--或-+--,，再根據LST肉湯陽性管數(shù)查MPN表,，報告每克（毫升）樣品中大腸桿菌MPN值。
注：本文參照SN0169-92《出口食品中大腸菌群,、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法》
