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ELISPOT技術(shù)原理和技術(shù)特點(diǎn)
ELISPOT全名為酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢測,，英文：Enzyme-linkedImmunospotAssay,。它結(jié)合了細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)（即ELISA技術(shù)）,，能夠在單細(xì)胞水平檢測細(xì)胞因子的分泌情況,。其技術(shù)原理,，一句話概括就是：用抗體捕獲培養(yǎng)中的細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子,，并以酶聯(lián)斑點(diǎn)顯色的方式將其表現(xiàn)出來（SedgwickJD2005）,。該技術(shù)檢測細(xì)胞因子具有三大優(yōu)點(diǎn)：其一,，靈敏度高,。在一百萬個陰性細(xì)胞中只要有一個分泌細(xì)胞因子的陽性細(xì)胞即可被檢測出來。這是目前為止,，zui為靈敏的檢測技術(shù),，靈敏度比傳 -
運(yùn)用流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)細(xì)胞應(yīng)注意的問題
運(yùn)用流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)細(xì)胞應(yīng)注意的問題制作組織勻漿或細(xì)胞懸液，用熒光染料染色，則可以用流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)不同DNA含量或倍數(shù)的細(xì)胞數(shù),。例如,，在睪丸組織中，精子細(xì)胞為單倍體細(xì)胞,，精原細(xì)胞,、Sertoli細(xì)胞、Leydig細(xì)胞和其他非生精細(xì)胞為雙倍體細(xì)胞,，初級精母細(xì)胞以及處于分裂期的精原細(xì)胞和非生精細(xì)胞為四倍體細(xì)胞,。因此，運(yùn)用流式細(xì)胞儀測定睪丸組織各級生精細(xì)胞DNA倍體的變化,，可以間接判斷不同生精細(xì)胞數(shù)目相對比例變化的趨勢,。但是，利用這些結(jié)果得出結(jié)論時一定要謹(jǐn)慎,。例如,，單倍體細(xì)胞數(shù)所占百分比下降可能說明精子 -
流式細(xì)胞儀的工作原理流式細(xì)胞儀主要由四部分組成：流動室和液流系統(tǒng)，激光源和光學(xué)系統(tǒng),，光電管和檢測系統(tǒng),，計(jì)算機(jī)和分析系統(tǒng)。四大系統(tǒng)共同完成信號的產(chǎn)生,、轉(zhuǎn)換和傳輸任務(wù),。檢測時將待測細(xì)胞或微粒制成細(xì)胞懸液，進(jìn)行熒光染色后加入樣品管中,。以一定壓力將待測樣品壓人流動室,，在高壓下磷酸緩沖液（鞘液）從鞘液管噴出，鞘液管人口方向與待測樣品流成一定角度,，這樣,，鞘液就能夠包繞著樣品高速流動，組成一個圓形流束（鞘流）,，待測細(xì)胞在鞘液包繞下單行排列,，依次通過檢測區(qū)。流式細(xì)胞儀通常以激光作為發(fā)光源,。經(jīng)過聚焦后的光束,，垂直
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細(xì)胞培養(yǎng)小技巧---操縱時間的藝術(shù)
眾所周之，每次給細(xì)胞換液體的時候都需要把細(xì)胞拿出來,，然而就這一拿,，“學(xué)問”就在里面：我們要盡量縮短細(xì)胞在培養(yǎng)箱外面的時間，盡量增加細(xì)胞在zui適環(huán)境中的時間,。換液流程：1.將培養(yǎng)基放在37度水浴鍋內(nèi),，準(zhǔn)備好廢液缸、吸管、酒精棉球,，干棉球,，在超凈臺上，將照相機(jī)放在顯微鏡旁邊,，然后開超靜臺紫外,，開培養(yǎng)室紫外，開培養(yǎng)室風(fēng)機(jī),，空調(diào),。2.30min后，進(jìn)培養(yǎng)室,。3.關(guān)紫外,，開超凈臺風(fēng)機(jī)，酒精擦手,，關(guān)水浴鍋，將水浴鍋內(nèi)的培養(yǎng)基放在超凈臺上,，用干棉球擦干,，然后開蓋，準(zhǔn)備好吸管,。4.這個時候再從培養(yǎng)箱里將培養(yǎng)瓶 -
細(xì)胞培養(yǎng)之無菌技術(shù)注意事項(xiàng)匯總
簡介細(xì)胞培養(yǎng)的成功很大程度上取決于保護(hù)細(xì)胞免受細(xì)菌,、真菌和病毒等微生物的污染。非無菌物品,、培養(yǎng)基和試劑,、帶有微生物的空氣顆粒、不干凈的培養(yǎng)箱和污染的工作臺面均是導(dǎo)致微生物污染的來源,。無菌技術(shù)的作用是在環(huán)境微生物與無菌的細(xì)胞培養(yǎng)物之間形成一道屏障,，它通過一套操作流程來降低培養(yǎng)物被上述污染源污染的可能。無菌技術(shù)的組成要素包括：無菌工作區(qū)域,、良好的個人衛(wèi)生,、無菌試劑和培養(yǎng)基以及無菌操作。無菌工作區(qū)域zui為簡單,、經(jīng)濟(jì)的減少空氣顆粒和氣體揮發(fā)（例如：灰塵,、芽孢、皮屑,、噴嚏）污染的方法就是采用細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng) -
體外細(xì)胞的原代培養(yǎng),、傳代培養(yǎng),、凍存和復(fù)蘇
一、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞培養(yǎng)可分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。直接從體內(nèi)獲取的組織細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)為原代培養(yǎng),；當(dāng)原代培養(yǎng)的細(xì)胞增殖達(dá)到一定密度后,，則需要做再培養(yǎng)，即將培養(yǎng)的細(xì)胞分散后,，從一個容器以1：2或其他比率轉(zhuǎn)移到另一個或幾個容器中擴(kuò)大培養(yǎng),，為傳代培養(yǎng)，傳代培養(yǎng)的累積次數(shù)就是細(xì)胞的代數(shù),。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,，實(shí)驗(yàn)證明這樣可以zui大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或DMSO作保護(hù)劑,，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性,，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,，從而減少 -
細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)
一,、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?,、掌屋凋亡細(xì)胞的形態(tài)特征2、學(xué)會用熒光探針對細(xì)胞進(jìn)行雙標(biāo)記來檢測正?；罴?xì)胞,、凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞的方法二、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞死亡根據(jù)其性質(zhì),、起源及生物學(xué)意義區(qū)分為凋亡和壞死兩種不同類型,。凋亡普遍存在于生命界，在生物個體和生存中起著非常重要的作用,。它是細(xì)胞在一定生理?xiàng)l件下一系列順序發(fā)生事件的組合,，是細(xì)胞遵循一定規(guī)律自己結(jié)束生命的自主控制過程。細(xì)胞凋亡具有可鑒別的形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)特征,。在形態(tài)上可見凋亡細(xì)胞與周圍細(xì)胞脫離接觸,，細(xì)胞變園，細(xì)胞膜向內(nèi)皺縮,、胞漿濃縮,、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張、細(xì)胞核固縮破裂呈團(tuán)塊狀
