聯(lián)系電話
上海北諾生物科技有限公司
中級會員·14年
- 聯(lián)系人：
- 周經(jīng)理 劉經(jīng)理
- 電話：
- 021-57730393
- 手機：
- 15800960770
- 傳真：
- 86-021-61496710
- 地址：
- 上海市徐匯區(qū)宜山路520號中華門大廈18樓D座
- 個性化：
- www.bnbiotech.com
- 網(wǎng)址：
- www.bnbiotech.com
掃一掃訪問手機商鋪
-
【感受態(tài)細胞的制備】 用CaCl2處理制備新鮮的大腸桿菌感受態(tài)細胞
1.從37℃培養(yǎng)16~20h的新鮮平板中挑取一個單菌落（如大腸桿菌DH52）,，或1ml新鮮的16~20h過夜培養(yǎng)物，轉(zhuǎn)到一個含有100mlLB培養(yǎng)基的1L或500ml培養(yǎng)瓶中,。于37℃振搖培養(yǎng)約2~3h（旋轉(zhuǎn)搖床200~300r/min）,，每隔20~30min測量OD600值≈0.4。2.在無菌條件下將細菌轉(zhuǎn)移到一個,，用冰預(yù)冷的50ml聚丙烯離心管中,，冰上放置10~20min。3.于4℃4000轉(zhuǎn)/分離心10min,，回收細菌細胞,。4.將管倒置1min，以使zui后殘留的痕量培養(yǎng)液流盡,。5.以10 -
【感受態(tài)細胞的制備】 電擊和熱擊感受態(tài)細胞的制備
實驗試劑LB培養(yǎng)基,，KB培養(yǎng)基，10%甘油,，液氮,，0.1MCaC12溶液實驗設(shè)備超凈工作臺，搖床,，離心機,，250mL離心瓶，0.5mL的離心管實驗材料大腸桿菌,，農(nóng)桿菌和假單胞桿菌實驗步驟1.電擊感受態(tài)細胞的制備1）-80℃保存的大腸桿菌,，農(nóng)桿菌或者假單胞桿菌在固體平板上（DH，BL21在LB平板上,，GV3101在LB/Gen;P.s.pv.tomato0288-9和P.syringaepv.tabaci6505在KB平板上）劃線,。2）接種單克隆于5-10mL液體培養(yǎng)基，37℃（大腸桿菌）或者28 -
細胞表面分子流式檢測步驟說明注意事項1．在使用抗體之前,，快速甩動一下,，使之聚集到管的底部；2．熒光標記的抗體應(yīng)該避光保存在4℃,，不要冷凍,；3．當染色的時候，固定或延遲分析可能降低某些抗體的熒光信號,。為了得到更好的結(jié)果,，染色后應(yīng)該馬上分析。過程概述：1．制作外周血,、淋巴組織或者培養(yǎng)細胞的單細胞懸液,；2．細胞染色抗體（包括直接標記抗體和間接標記抗體）；3．洗滌步驟棄掉所有的為束縛的試劑4．運行分析流式儀。注意：流式細胞染色實驗中,，所有實驗條件的優(yōu)化都很重要,。關(guān)鍵參數(shù)包括靶細胞、抗體效價以及動力學(xué),。試
-
方案A：兩步法胞內(nèi)（細胞質(zhì)）蛋白染色,。方案B：一步法胞內(nèi)蛋白染色（細胞核）。注意：1,、不同細胞因子的刺激條件是不同的,，比如：LPS刺激活化單核細胞分泌IL-6的培養(yǎng)時間一般是6個小時，而檢測IL-10則需要刺激24小時,。2,、結(jié)合熒光的流式抗體應(yīng)在4度，避光儲存,。3,、使用抗體前請低速離心30秒，使貼壁抗體沉底,。不建議斡旋混勻抗體,，可用手指輕彈混勻。4,、除非方案中注明,，默認的抗體孵育方法是冰上或4度避光。5,、緩沖液中加BSA或FBS可以減少固定破膜后的非特異性背景,。方案A:兩步法胞內(nèi)（細胞質(zhì)）蛋白染
-
方案A：細胞懸液的表面抗原染色。方案B：一步法胞內(nèi)蛋白染色（細胞核）,。小貼士：1,、流式抗體要儲存于避光4度，嚴格避免凍融,。2,、流式抗體使用前要離心3min，避免貼壁蓋的損失,，請勿斡旋混勻,。3、避免細胞成團,，以免堵塞流式細胞儀,。4、eFluor納米晶體抗體參照該品說明進行改善,。方案A:細胞懸液的表面抗原染色實驗材料：15×75mm圓底流式管或96孔板直標一抗或純化抗體二抗（可選）抗小鼠CD32/16抗體（eBioscienceCat.No.14-0161）人FC?R結(jié)合抑制劑（eBioscienc
-
方案A：組織培養(yǎng)細胞的制備。方案B：淋巴組織細胞制備,。方案C：非淋巴組織細胞制備,。方案D：全血PBMC的分離,。小貼士1、流式細胞儀檢測需要將細胞制備成單細胞懸液,。2,、避免細胞成團，以免堵塞流式細胞儀,。3,、實體組織制備單細胞懸液需要物理方法分離或酶消化法進行，具體組織的方法,，依照經(jīng)驗來進行,。方案A:組織培養(yǎng)細胞的制備實驗材料：Accutase™酶細胞分離培養(yǎng)基（eBioscienceCat.No.00-4555）eBioscience®流式染色緩沖液（eBioscienceCat.No.00-42
-
以CaspGLOW™FluoresceinActiveCaspase-3StainingKit（88-7004）為例。1.根據(jù)文獻中方法誘導(dǎo)靶細胞凋亡,，準備未誘導(dǎo)細胞作為陰性對照,，另外一種陰性對照用1ulZ-VAD-FMK抑制劑制備。2.將細胞加入300ul*培養(yǎng)基中,，濃度為1×106.3.加1ulFITC-DEVD-FMK在5%CO237攝氏度下孵育30~60min.4.3000rpm,，5min,移去上清。5.加入0.5mlwash-buffer洗滌細胞一次,。6.重復(fù)步驟4和步驟5.7.流式細
-
類型檢測名稱檢測方法主要特點體內(nèi)功能檢驗遲發(fā)型超敏反應(yīng)法皮下注射抗原或者負載抗原的DC,，觀察紅斑、硬塊的發(fā)生與大小優(yōu)點：體內(nèi)功能性檢驗,，相對比較容易操作,；缺點：只是一種初篩，加陽性與假陰性比較嚴重,。體外表型檢測TCR可變區(qū)分析法使用針對T細胞受體（TCR）可變區(qū)的流式抗體來對表達特定可變區(qū)的T細胞計數(shù)優(yōu)點：可以提供關(guān)于可變區(qū)使用的群體分布,；缺點：識別同一種抗原的TCR的可變區(qū)可能不相同；單抗不夠豐富,，不能檢測所有種類的可變區(qū),。多肽MHC四聚體法（Tetramer）用熒光標記的MHC-肽四聚體去結(jié)
