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（一）無菌操作前的準備工作培養(yǎng)材料接種時的無菌操作過程除上述各項消毒滅菌操作外,，還需完成以下無菌操作步驟,，從而獲得接種的無菌培養(yǎng)材料,。工作人員無菌操作前需用肥皂刷洗雙手及手臂,，并用流水沖凈,，并對手臂消毒后穿戴好滅菌工作服,、工作帽和口罩,，更換拖鞋,，才能進入無菌操作區(qū),。如進入層流操作室進行實驗操作，應(yīng)完成緩沖準備區(qū)內(nèi)的淋浴,、一次更換滅菌衣帽,、拖鞋；手臂消毒,、二次更換滅菌防護衣帽,、手套、拖鞋等,；再在風(fēng)淋區(qū)進行無菌風(fēng)淋后方可進入層流操作室,。進入無菌操作區(qū)后,，再用70%～75%的酒精擦拭雙手和前臂，完成無
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食品中菌落總數(shù)的測定,，目的在于了解食品在生產(chǎn)中,，從原料加工到成品包裝受外界污染的情況；也可以應(yīng)用這一方法觀察細菌在食品中繁殖的動態(tài),，確定食品的保存期,，以便對被檢樣品進行衛(wèi)生學(xué)評價時提供依據(jù)。食品有可能被多種類群的微生物所污染,，每種細菌都有它一定的生理特性,，培養(yǎng)時應(yīng)用不同的營養(yǎng)條件及其生理條件（如溫度、培養(yǎng)時間,、PH值,、需氧性質(zhì)等）去滿足其要求，才能分別將各種細菌培養(yǎng)出來,。但在實際工作中,，一般都只用一種常用的方法去作菌落總數(shù)的測定，所得結(jié)果,，只包括一群能在營養(yǎng)瓊脂上發(fā)育的嗜中溫性需氧菌的菌落數(shù),。國
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轉(zhuǎn)染，是將外源性基因?qū)爰毎麅?nèi)的一種專門技術(shù),。隨著基因與蛋白功能研究的深入,，轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo),、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑,。電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因?qū)爰毎姆独?；化學(xué)介導(dǎo)方法很多,，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法,、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù),；生物介導(dǎo)方法，有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染,，和現(xiàn)在比較多見的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù),。理想細胞轉(zhuǎn)染方法，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高,、細胞毒性小等優(yōu)點,。病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)，是目前轉(zhuǎn)染效率zui
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專題：轉(zhuǎn)染（transfection）--轉(zhuǎn)染試劑的選擇
下面我們?yōu)榇蠹姨峁┮恍┏Ｓ弥|(zhì)體試劑的適用細胞系信息以及轉(zhuǎn)染FAQs：1.promega公司Promega轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品適合于人HeLa，HepG2,，293,，K562，Jurkat,；猴COS-7,，CV-1；小鼠NIH3T3,；倉鼠BHK,，CHO；大鼠PC12,；昆蟲S19等等細胞系的RNAi轉(zhuǎn)染,。詳情請參閱http：//www.promega.com.cn/files/cpxl/zhuanran/zhuanran.htm2.Invitrogen公司根據(jù)經(jīng)驗，我公司推薦您使用Invitrogen公司生產(chǎn) -
1．瞬時轉(zhuǎn)染分析法目前有很多功能性分析方法用于研究轉(zhuǎn)錄調(diào)控,，zui常用的方法是瞬時轉(zhuǎn)染分析法,。該方法是通過一定的轉(zhuǎn)染程序?qū)⒑康恼{(diào)控區(qū)的質(zhì)粒導(dǎo)人培養(yǎng)細胞。在典型情況下,，調(diào)控區(qū)調(diào)控“報告基因”的轉(zhuǎn)錄,。報告基因是在mRNA和蛋白質(zhì)的水平上都易于被正確檢測到的基因。產(chǎn)生的質(zhì)粒在培養(yǎng)細胞中轉(zhuǎn)錄后,，在特定時刻測定從報告基因上合成的mRNA或蛋白質(zhì),，以評價調(diào)控區(qū)的活性。人們將這種分析方法稱為瞬時轉(zhuǎn)染分析,，因為此時質(zhì)粒仍然以附加的形式存在,，很少整合進宿主基因組,。因此,，mRNA或蛋白質(zhì)產(chǎn)物必須在短時間內(nèi)（1～3
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將制備好的siRNA，siRNA表達載體或表達框架轉(zhuǎn)導(dǎo)至真核細胞中的方法主要有以下幾種：1.磷酸鈣共沉淀將氯化鈣,，RNA（或DNA）和磷酸緩沖液混合,，沉淀形成包含DNA且極小的不溶的磷酸鈣顆粒。磷酸鈣-DNA復(fù)合物粘附到細胞膜并通過胞飲進入目的細胞的細胞質(zhì),。沉淀物的大小和質(zhì)量對于磷酸鈣轉(zhuǎn)染的成功至關(guān)重要,。在實驗中使用的每種試劑都必須小心校準，保證質(zhì)量,，因為甚至偏離*條件十分之一個pH都會導(dǎo)致磷酸鈣轉(zhuǎn)染的失敗,。2.電穿孔法電穿孔通過將細胞暴露在短暫的高場強電脈沖中轉(zhuǎn)導(dǎo)分子。將細胞懸浮液置于電場中會
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專題:脂質(zhì)體介導(dǎo)DNA轉(zhuǎn)染法
脂質(zhì)體（lipofectinregeant,LR）試劑是陽離子脂質(zhì)體N-[1-2,，3-Dioleyoxy,Propyl]-n,n,n-TrimethylammoniumChloride（DOTMA）和Dioleoylphotidye-thanolamine（DOPE）的混合物[1:1（w/w）],。它適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細胞中，是目前條件下zui方便的轉(zhuǎn)染方法之一。轉(zhuǎn)染率高,，優(yōu)于磷酸鈣法,，比它高5～100倍，能把DNA和RNA轉(zhuǎn)染到各種細胞,。用LR進行轉(zhuǎn)染時,，首先需優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，應(yīng)找 -
ELISPOT技術(shù)的*優(yōu)點已經(jīng)讓它在抗原特異性T細胞免疫學(xué)研究上*,。它是當今*能夠檢測到到百萬分之一陽性細胞率的檢測技術(shù),。如此高的靈敏度就連流式細胞技術(shù)（細胞內(nèi)細胞因子染色）和tetramer技術(shù)也*（LetschAet.al.，2003）,。此外由于淋巴細胞的凍存復(fù)蘇問題也得到了的解決,，經(jīng)過凍存復(fù)蘇的細胞并不喪失免疫功能（MaeckerHTet.al.，2005,；KvarnstromMet.al.,，2004）。這一點對臨床試驗非常重要,，它使科研人員得以并行分析免疫治療前,、后的病人血樣。如果試驗牽
