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（一）無菌操作前的準(zhǔn)備工作
培養(yǎng)材料接種時的無菌操作過程除上述各項(xiàng)消毒滅菌操作外，還需完成以下無菌操作步驟,，從而獲得接種的無菌培養(yǎng)材料,。
工作人員無菌操作前需用肥皂刷洗雙手及手臂,，并用流水沖凈，并對手臂消毒后穿戴好滅菌工作服,、工作帽和口罩,，更換拖鞋，才能進(jìn)入無菌操作區(qū),。如進(jìn)入層流操作室進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作,，應(yīng)完成緩沖準(zhǔn)備區(qū)內(nèi)的淋浴、一次更換滅菌衣帽,、拖鞋,；手臂消毒、二次更換滅菌防護(hù)衣帽,、手套,、拖鞋等；再在風(fēng)淋區(qū)進(jìn)行無菌風(fēng)淋后方可進(jìn)入層流操作室,。進(jìn)入無菌操作區(qū)后,，再用70%～75%的酒精擦拭雙手和前臂，完成無菌操作準(zhǔn)備工作,。
用70%～75%酒精擦洗工作臺面后，將已消毒滅菌的實(shí)驗(yàn)用品取出,，并將操作器械放置在無菌器械支架上,，然后開始實(shí)驗(yàn)操作。在實(shí)驗(yàn)操作過程中,，對所有操作器械每次使用后都要進(jìn)行滅菌,，常采用酒精燈火焰灼燒滅菌。
（二）無菌操作步驟
準(zhǔn)備工作完成后,，對來自于自然生長條件下的外植體,，按上述培養(yǎng)材料消毒方法滅菌后取出，放入已滅菌的培養(yǎng)皿中,，然后置超凈工作臺酒精燈火焰下方,，用滅菌剪刀等器械進(jìn)行適當(dāng)分離、切割或其它處理后備用,。
在酒精燈火焰處將培養(yǎng)容器的瓶塞（蓋）輕輕打開,，瓶口在燈焰處旋轉(zhuǎn)灼燒，用鑷子將培養(yǎng)材料置入培養(yǎng)液上,，將鑷子在酒精瓶中浸蘸酒精,，置酒精燈上灼燒后放回支架，然后迅速灼燎瓶塞（蓋）數(shù)秒后塞回瓶口,。對繼代培養(yǎng)材料的無菌操作,，需在燈焰處打開瓶塞（蓋）,，繼代材料為液體培養(yǎng)細(xì)胞時直接用滅菌吸管吸取培養(yǎng)細(xì)胞液放入新培養(yǎng)液中；繼代材料為固體培養(yǎng)細(xì)胞時用滅菌鑷子挑取適量材料置新培養(yǎng)液上,；繼代材料為其他組織時,，用滅菌剪刀或其他器械進(jìn)行培養(yǎng)材料適當(dāng)切割后，用滅菌鑷子將其置于新培養(yǎng)液上（中）,，然后迅速灼燎瓶塞（蓋）數(shù)秒后塞回瓶口,。
在酒精燈火焰處將培養(yǎng)容器的瓶塞（蓋）輕輕打開,，瓶口在燈焰處旋轉(zhuǎn)灼燒，用鑷子將培養(yǎng)材料置入培養(yǎng)液上,，將鑷子在酒精瓶中浸蘸酒精,，置酒精燈上灼燒后放回支架，然后迅速灼燎瓶塞（蓋）數(shù)秒后塞回瓶口,。對繼代培養(yǎng)材料的無菌操作,，需在燈焰處打開瓶塞（蓋）,，繼代材料為液體培養(yǎng)細(xì)胞時直接用滅菌吸管吸取培養(yǎng)細(xì)胞液放入新培養(yǎng)液中；繼代材料為固體培養(yǎng)細(xì)胞時用滅菌鑷子挑取適量材料置新培養(yǎng)液上,；繼代材料為其他組織時,，用滅菌剪刀或其他器械進(jìn)行培養(yǎng)材料適當(dāng)切割后，用滅菌鑷子將其置于新培養(yǎng)液上（中）,，然后迅速灼燎瓶塞（蓋）數(shù)秒后塞回瓶口,。
（三）污染源及其表現(xiàn)特征
當(dāng)培養(yǎng)材料、轉(zhuǎn)接器皿,、無菌操作環(huán)境等消毒滅菌不*時,，培養(yǎng)材料則攜帶有微生物（microorganism），當(dāng)其被轉(zhuǎn)接到營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)液上時,，微生物繁殖迅速,，出現(xiàn)各種污染菌斑。
微生物生長時分泌出對植物組織有毒的代謝廢物,，致使培養(yǎng)材料死亡或失去使用價值,。在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)材料附近出現(xiàn)黏液或混濁的水跡,，并有發(fā)酵狀泡沫,，這是細(xì)菌性污染。在細(xì)菌性污染中,，特別要注意一種呈乳白色的芽孢桿菌污染,，它可出現(xiàn)在培養(yǎng)液表面，或呈滴形云霧狀存在于培養(yǎng)液內(nèi),，若出現(xiàn)應(yīng)嚴(yán)格滅菌,。而培養(yǎng)液表面出現(xiàn)的黃色、白色,、黑色等不同顏色的霉菌,，這是真菌性污染。
微生物生長時分泌出對植物組織有毒的代謝廢物,，致使培養(yǎng)材料死亡或失去使用價值,。在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)材料附近出現(xiàn)黏液或混濁的水跡,，并有發(fā)酵狀泡沫,，這是細(xì)菌性污染。在細(xì)菌性污染中,，特別要注意一種呈乳白色的芽孢桿菌污染,，它可出現(xiàn)在培養(yǎng)液表面，或呈滴形云霧狀存在于培養(yǎng)液內(nèi),，若出現(xiàn)應(yīng)嚴(yán)格滅菌,。而培養(yǎng)液表面出現(xiàn)的黃色、白色,、黑色等不同顏色的霉菌,，這是真菌性污染。
