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ELISPOT技術(shù)的應(yīng)用與展望

2013-6-30　　閱讀(1300)

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ELISPOT技術(shù)的*優(yōu)點(diǎn)已經(jīng)讓它在抗原特異性T細(xì)胞免疫學(xué)研究上*,。它是當(dāng)今*能夠檢測(cè)到到百萬分之一陽性細(xì)胞率的檢測(cè)技術(shù),。如此高的靈敏度就連流式細(xì)胞技術(shù)（細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色）和tetramer技術(shù)也*（Letsch A et. al.， 2003）,。此外由于淋巴細(xì)胞的凍存復(fù)蘇問題也得到了的解決,，經(jīng)過凍存復(fù)蘇的細(xì)胞并不喪失免疫功能（Maecker HT et. al.， 2005,；Kvarnstrom M et. al.,， 2004）。這一點(diǎn)對(duì)臨床試驗(yàn)非常重要,，它使科研人員得以并行分析免疫治療前,、后的病人血樣。如果試驗(yàn)牽涉全國(guó)乃至多個(gè)臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu),，病人血樣可凍存,、運(yùn)輸?shù)降胶诵膶?shí)驗(yàn)室儀器檢測(cè)。同理,，一個(gè)實(shí)驗(yàn)樣品或標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品可分裝凍存,，運(yùn)輸?shù)讲煌膶?shí)驗(yàn)室檢測(cè)，以資比較,。

所以,，ELISPOT技術(shù)的應(yīng)用在國(guó)外已經(jīng)*普及。凡是需要進(jìn)行免疫學(xué)檢測(cè)的地方機(jī)會(huì)都可以應(yīng)用該項(xiàng)技術(shù),。粗略的劃分可以分為以下幾類：

1,、疫苗研究開發(fā)

ELISPOT檢測(cè)已經(jīng)成為評(píng)價(jià)疫苗細(xì)胞免疫反應(yīng)zui有效的指標(biāo)（Harrop R et. al.， 2004）,。我們知道,，疫苗的保護(hù)效果可以分為兩部分：體液免疫保護(hù)和細(xì)胞免疫保護(hù)。有效的疫苗不僅能夠激發(fā)強(qiáng)烈的體液免疫,，也能激發(fā)有效的細(xì)胞免疫（Holmgren J et. al.,， 1992b）。對(duì)于某些持續(xù)性感染的疾病,，疫苗的細(xì)胞免疫保護(hù)效果甚至居于主要地位,。zui的例子是艾滋病疫苗開發(fā)（Lee FK et. al.， 1989,；Stratov I et. al.,， 2004）。由于艾滋病毒的超級(jí)突變能力，體液免疫往往會(huì)被病毒輕易逃避,，體內(nèi)真正控制病毒復(fù)制的因素是細(xì)胞免疫反應(yīng),，即清除受感染的CD4+細(xì)胞（Vahlne A et. al.， 1991,；Maecker HT et. al.,， 2003）。除了預(yù)防性的疫苗開發(fā)之外,，治療性疫苗也是目前疫苗開發(fā)的重要組成部分,。治療疫苗的主要功能在于重新激發(fā)起人體內(nèi)被抑制的針對(duì)病源細(xì)胞免疫反應(yīng)。目前的治療儀表包括乙肝疫苗,、黑色素瘤疫苗（Zarour HM et. al.,， 2003）、肝癌疫苗（Chi KH et. al.,， 2005）,、自身免疫疫苗等等。

2,、臨床指導(dǎo)

許多疾病的發(fā)生,、發(fā)展都是與人體的免疫系統(tǒng)異常相關(guān)聯(lián)的。比如各種自身免疫疾?。篒-型糖尿?。↘arlsson Faresjo MG et. al.， 2005）,，多發(fā)硬化癥（Moldovan IR et. al.,， 2005）、系統(tǒng)性紅斑狼瘡（Kalsi JK et. al.,， 2004）,、牛皮癬/銀屑病（Sigmundsdottir H t. al.,， 1997）,、結(jié)核病（Restrepo BI 2004）,、自身免疫性心肌炎（Maier R et. al.,， 2005）,、自身免疫性感音性耳聾（Solares CA et. al.,， 2005）、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（Klatt T et. al.,， 2005）,、.視神經(jīng)脊髓炎（Correale J et. al.， 2004）等等。在這些疾病的診斷,、病因查找中,，ELISPOT檢測(cè)可以提供非常重要的信息，甚至成為zui終指標(biāo),。比如在I-型糖尿病的診斷中,，ELISPOT可以提供zui終的判定依據(jù)（Meierhoff G et. al.， 2002）,。而對(duì)有糖尿病史的家族,，做ELISPOT檢測(cè)，甚至可以在疾病發(fā)作之前5-10年作出（Karlsson Faresjo MG et. al.,， 2005,；Seissler J et. al.， 2001）,。這對(duì)于指導(dǎo)病人的日常生活,，提高治療效果有著重要的現(xiàn)實(shí)意義。

ELISPOT除了直接用于臨床診斷,，還可以對(duì)于治療和用藥提供重要的參考信息,。比如對(duì)于器官移植者，用ELISPOT監(jiān)視患者體內(nèi)的免疫排斥反應(yīng),，可以有針對(duì)性的用藥,，避免盲目的使用免疫抑制劑（Tung TH et. al.， 2005）,。這對(duì)于增加移植手術(shù)的成功率,，延長(zhǎng)移植器官的存活率，提高病人的生活質(zhì)量意義重大（van Besouw NM et. al.,， 2005,；Tambur AR et. al.， 2005）,。類似的ELISPOT免疫監(jiān)視也見于基因治療的病人（Whiteside TL et. al.,， 2003）。再比如對(duì)于乙肝病人,，如果用ELISPOT檢測(cè)觀者所處的免疫階段（急性期,、平穩(wěn)期、耐受期,、恢復(fù)期）,，有針對(duì)的用藥，同時(shí)評(píng)估各種藥物對(duì)于觀者的治療效果,，遠(yuǎn)優(yōu)于盲目治療（Fan ZP et. al.,， 2004,；Lohr HF et. al.， 1998）,。

3,、基礎(chǔ)研究

ELISPOT技術(shù)本來就是在基礎(chǔ)研究中創(chuàng)立和發(fā)展起來的。生物學(xué)和醫(yī)學(xué)的基礎(chǔ)研究日新月異,，ELISPOT有不可磨滅的功勛,。但也正是由于基礎(chǔ)研究的發(fā)展快，ELISPOT的應(yīng)用廣,，所以才難于分門別類,。客觀地說,，在一切免疫學(xué)研究的前沿領(lǐng)域,，ELISPOT都是zui有力的研究工具之一。比如研究人體的免疫系統(tǒng)功能,，研究Th0/Th1/Th2細(xì)胞轉(zhuǎn)換分析（Ott PA et. al.,， 2005），研究機(jī)體的過敏機(jī)制（Bordignon V et. al.,， 2005,；Chapoval SP et. al.， 2002）,，研究癌癥的免疫機(jī)制（Andersen MH et. al.,， 2005；Alix-Panabieres C et. al.,， 2005）,，研究和篩選有效的T細(xì)胞表位肽（Anthony DD et. al.， 2003）等等等等,，可謂名目繁多,，不一而足。ELISPOT技術(shù)在基礎(chǔ)研究方面所受的限制不在于技術(shù)本身,，而在于我們的想象能力與創(chuàng)新思維,。

展望未來的ELISPOT技術(shù)，會(huì)在技術(shù)進(jìn)步本身和應(yīng)用領(lǐng)域擴(kuò)展兩個(gè)方面都有長(zhǎng)足的發(fā)展,。就技術(shù)本身來說,，更好的底板材料，無血清檢測(cè)技術(shù),，雙因子檢測(cè),，多因子熒光檢測(cè)，都會(huì)逐漸成熟起來,。ELISPOT應(yīng)用領(lǐng)域的拓展可以從每年發(fā)表文獻(xiàn)的數(shù)量變化上反映出來,。圖顯示了美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生院生物信息中心論文數(shù)據(jù)庫(kù)（NCBI PubMed）收錄的自ELISPOT創(chuàng)立以來年度論文的數(shù)目。該圖反映了ELISPOT技術(shù)經(jīng)歷起起伏伏,，終于發(fā)揚(yáng)光大,，成為免疫學(xué)主流檢測(cè)技術(shù)的歷程。

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