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實驗試劑
LB培養(yǎng)基，KB培養(yǎng)基,，10%甘油,，液氮，0.1M CaC12 溶液
實驗設備
超凈工作臺,，搖床,，離心機，250mL離心瓶,，0. 5mL的離心管
實驗材料
實驗步驟
2） 接種單克隆于5-10mL液體培養(yǎng)基,，37℃ （大腸桿菌）或者28℃ （農桿菌和假單胞桿菌）培養(yǎng)過夜,。
4） 將菌液裝入250mL離心瓶中,，冰上放置30分鐘后，4℃ 離心15分鐘,。
5） 棄上清,，加入200mL 10%甘油，于冰上緩慢將菌搖散,，4℃ 離心15分鐘,。
6） 重復前一步驟2-3次，zui后棄上清,，加入少量10%甘油重懸細菌,。
7） 分裝于0. 5mL的離心管中，每管40ul,，液氮速凍,，-80℃ 存放。
1） 挑取E.coli BL21單克隆接種到5mL LB培養(yǎng)液中，37℃ 振蕩培養(yǎng)過夜,。
2） 按照1:100-1:500轉接到500-1000mL液體培養(yǎng)基,，37℃ 培養(yǎng)3-4小時至細菌達到對數(shù)生長期。
3） 將菌液裝入250mL離心瓶中,，冰上放置30分鐘后,，4℃ 離心15分鐘。
4） 棄上清,，加20mL預冷的0.1M CaC12 溶液輕輕懸浮菌體,，冰上放置15-30分鐘后于4℃ 離心5分鐘。
