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一,、原理
質(zhì)粒DNA粘附在細(xì)菌細(xì)胞表面,，經(jīng)過42°C短時(shí)間的熱擊處理，促進(jìn)吸收DNA.然后在非選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)一代,，待質(zhì)粒上所帶的抗菌素基因表達(dá),，就可以在含抗菌素的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。
二,、器材
旋渦混合器,，微量移液取樣器,，移液器吸頭,，1.5ml 微量離心管,，雙面微量離心管架，干式恒溫氣?。ɑ蚝銣厮″仯?，制冰機(jī)，恒溫?fù)u床,，培養(yǎng)皿（已鋪好固體LB-Amp）,，超凈工作臺(tái)，酒精燈,，玻璃涂棒,，恒溫培養(yǎng)箱。
三,、試劑
培養(yǎng)基（不加抗菌素）,，LB培養(yǎng)基（加抗菌素），無菌ddH2O,IPTG,X-gal.
四,、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
無菌ddH2O,，1.5ml離心管裝入鋁制飯盒（滅菌）、移液器吸頭裝入相應(yīng)的吸頭盒（滅菌）,，20%IPTG（M/V）,，2% X-gal（M/V，用N,N-二甲基甲酰胺配）,。
五,、操作步驟
（1）事先將恒溫水浴的溫度調(diào)到42℃。
（2）從-70℃ 超低溫冰柜中取出一管（100μl）感受態(tài)菌,，立即用手指加溫融化后插入冰上,，冰浴5~10min。
（3） 加入5μl連接好的質(zhì)?；旌弦海―NA含量不超過100ng）,，輕輕震蕩后放置冰上20min。
（4） 輕輕搖勻后插入42℃水浴中1~2min進(jìn)行熱休克,，然后迅速放回冰中,，靜置3~5min。
（5） 在超凈工作臺(tái)中向上述各管中分別加入500μl LB培養(yǎng)基（不含抗菌素）輕輕混勻,，然后固定到搖床的彈簧架上37℃震蕩1h.
（6） 在超凈工作臺(tái)中取上述轉(zhuǎn)化混合液100~300μl,，分別滴到含合適抗菌素的固體LB平板培養(yǎng)皿中，用酒精燈燒過的玻璃涂布棒涂布均勻（注意：玻璃涂布棒上的酒精熄滅后稍等片刻,，待其冷卻后再涂）,。
（7） 如果載體和宿主菌適合藍(lán)白斑篩選的話，滴完菌液后再在平板上滴加40μl 2% X-gal,，8μl 20% IPTG,，用酒精燈燒過的玻璃涂布棒涂布均勻,。
（8） 在涂好的培養(yǎng)皿上做上標(biāo)記，先放置在37℃恒溫培養(yǎng)箱中30-60min直到表面的液體都滲透到培養(yǎng)基里后,，再倒置過來放入37℃恒溫培養(yǎng)箱
（9） 在被細(xì)菌污染的桌面上噴灑70%乙醇,，擦干桌面，寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告,。
（10）觀察平板上長(zhǎng)出的菌落克隆,，以菌落之間能互相分開為好。注意白色菌斑
