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做動物實(shí)驗(yàn),,zui先要做的事情就是要養(yǎng)好動物,。掌握好動物飼料、飲水及其生活環(huán)境,,這對于動物實(shí)驗(yàn)的成功是zui基本的保證,。這是看似一個平常,但卻有著不少細(xì)節(jié)的問題,。為了本版廣大站友能在整體上提高對實(shí)驗(yàn)動物飼養(yǎng)的認(rèn)識,,做好動物實(shí)驗(yàn)的*步,特此開設(shè)本貼討論動物飼養(yǎng)的問題,。希望大家能踴躍參與,,以更多的實(shí)例來充實(shí)、豐富本貼,。
擬分以下幾個方面來討論:
實(shí)驗(yàn)動物的選擇概述
實(shí)驗(yàn)動物如何辨雌雄
實(shí)驗(yàn)動物的適應(yīng)性飼養(yǎng)
實(shí)驗(yàn)動物的飼料(普通飼料,、特殊飼料)
實(shí)驗(yàn)動物的飲水
實(shí)驗(yàn)動物的籠具
實(shí)驗(yàn)動物的墊料
實(shí)驗(yàn)動物的飼養(yǎng)環(huán)境
實(shí)驗(yàn)動物的護(hù)理(造模后)
貼子中如有不當(dāng)之處,請大家不吝指出,!
*,、實(shí)驗(yàn)動物的選擇,。
實(shí)驗(yàn)動物如何選擇,?這個問題對于藥理和實(shí)驗(yàn)動物專業(yè)的朋友來說,不是難事,。但對于需要做動物實(shí)驗(yàn)的其它專業(yè)的朋友來說,,有時候會感到茫然?;蛘邲]有自己的思考,,照抄別人的做法。對于這一部分站友,,我們不可能要求去系統(tǒng)學(xué)習(xí)《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物學(xué)》,,但我們可以常備一本在身邊。在需要用的時候翻一翻,,將會使你豁然開朗,。因?yàn)闀斜容^詳細(xì)地介紹了常用實(shí)驗(yàn)動物的解剖生理、生物學(xué)習(xí)性等等,,zui主要的是它為你選擇什么樣的實(shí)驗(yàn)動物提供了重要的參考,。
因此,系統(tǒng)學(xué)習(xí)或者零星地翻閱《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物學(xué)》是保證合理選用實(shí)驗(yàn)動物的基礎(chǔ)之一,。再者就是要參考大量文獻(xiàn),。在此,,我不想對這一問題全面展開,只是提幾點(diǎn)原則和方法,。
*,,做什么樣的實(shí)驗(yàn)?什么動物適合本實(shí)驗(yàn),? 做什么實(shí)驗(yàn),,這是選題時就確定好了的??隙ㄊ墙?jīng)過論證的,。無需多講。 用什么樣的動物呢,?我想,,大多是參照文獻(xiàn),再結(jié)合自己對實(shí)驗(yàn)動物的了解,。選題之時就肯定閱讀過很多文獻(xiàn)了,,因此不會陌生。如:做高血脂,、動脈粥樣硬化,,我想大多數(shù)人會選擇大鼠、兔子,,也可以選金黃地鼠,、鵪鶉,少數(shù)人會選小鼠,,但我想用狗和猴的基本上不會有吧,。因?yàn)橐x擇比較容易形成此疾病的動物,且要易得,。 所以,,對于不太熟悉的人來說,要多看文獻(xiàn),,參考別人是如何選擇的,。就算是對動物比較了解,系統(tǒng)學(xué)過這方面知識的,,也要多看文獻(xiàn),,綜合權(quán)衡。切忌隨意地憑空想像,。
第二,,采取什么樣的方法造模? 做動物實(shí)驗(yàn)通常是要造模的,。選擇什么樣的方式,?這要從實(shí)驗(yàn)的目的及條件入手,。造糖尿病,可以用手術(shù),,也可以用藥物,。其中藥物有四氧嘧啶及鏈脲佐菌素(STZ)。后者用得較多,,且為認(rèn)同,。而四氧嘧啶目前用得較少了。造模方法一是參照《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》,,二是參照文獻(xiàn),。造模方法有時也決定了你的動物選擇。像做手術(shù)造動脈粥樣硬化,,我想用大鼠比小鼠來得方便吧,?
第三,經(jīng)費(fèi)承受能力如何,? 做實(shí)驗(yàn)也要精打細(xì)算,。不可能為了所謂的高水平、技術(shù)而不顧實(shí)驗(yàn)室的條件,。像做高脂動物模型,,假設(shè)經(jīng)費(fèi)只有一萬多元,一定要弄個敲除APoE基因的小鼠來做,,恐怕沒人認(rèn)同,。做一個簡單的鎮(zhèn)痛抗炎實(shí)驗(yàn),你非得要用SPF實(shí)驗(yàn)室,,這也是不太實(shí)際的,,也是沒必要的,。就像一個剛剛能滿足溫飽的人突然要花上很多錢去國外旅游一樣,,是不切實(shí)際的。因此,,實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)讓我們有時不能達(dá)到理想的狀態(tài),。但是,科研并不一定是要用的技術(shù),、的動物,,而是要能解決問題。能用簡單的技術(shù),、普通的動物解決問題的,,就不必去盲目追求更高。過于理想化,、不考慮經(jīng)費(fèi)問題,,是不少研究生初涉實(shí)驗(yàn)時的通病,。
第四,多了解一下實(shí)驗(yàn)中可能出現(xiàn)的問題,。有不少人做實(shí)驗(yàn)時根本沒有考慮可能出現(xiàn)的失誤,,因而在實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)問題時茫然無措。即使是造同樣的疾病模型,,不同的動物表現(xiàn)可能有不一樣的地方,。要對這些問題有充分的了解,并要進(jìn)行必要的預(yù)試,。要了解動物的習(xí)性,,并進(jìn)行必要的護(hù)理。 因此,,在你決定了選擇何種動物,,以何種方式造模之后,實(shí)際上,,你就要對整個實(shí)驗(yàn)過程有全面的計(jì)劃,,并對可能出現(xiàn)的問題有應(yīng)對的措施。
第二,、實(shí)驗(yàn)動物如何辨雌雄,?
這個問題應(yīng)該是每個初涉動物實(shí)驗(yàn)的人完*全掌握的,是不容許有任何一點(diǎn)差錯的,。 如何辯,?當(dāng)然是看生殖器了。一般大動物好辯,,像狗,,猴等;小動物及中等大小的體型的難辨一點(diǎn),,如:小鼠,、大鼠、兔,??捎邢铝蟹椒▉龛b別:
1. 看肛門與生殖器之間的距離:雄性隔得遠(yuǎn),雌性隔得近,。雄的生殖器與肛門間有陰囊,,不過幼齡時不太明顯。
2. 雄性陰莖朝頭的方向突出,,可輕輕擠壓包皮使其露出而確認(rèn),。雌性較小時可見閉合的陰道口,擠壓亦可張開。像兔,、豚鼠等,,陰莖短小,故較難辨認(rèn),。是擠壓生殖器以確認(rèn),。看得熟練了,,其實(shí)也不難,。生殖器處呈O型者,為公的,;生殖器處呈V型,,下端裂縫延至肛門者,為母的,。這主是針對幼齡的動物而言,。
3. 看乳頭或睪丸。成年的動物比較好辯認(rèn),。母的有乳頭,,雄的有睪丸。但在比較小的時候,,乳頭,,睪丸并不是那么明顯的。
辨雌雄的目的就是為了分籠飼養(yǎng),,避免雌雄同籠而交配,,無法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。不過,,即使是同性的放在一籠,,有些細(xì)節(jié)仍值得注意。 說一個小插曲:本人有一次將兩批做實(shí)驗(yàn)剩下的小鼠弄到一個籠里,。結(jié)果發(fā)現(xiàn)大的小鼠不斷追逐小的小鼠,,且試圖交配。一師妹在旁說,,是不是我弄了只雌的進(jìn)去了,?我仔細(xì)檢查了一下,根本沒有弄錯,。放回去,過了一會兒又發(fā)現(xiàn)如此現(xiàn)象,。后來我想可能是因?yàn)榇蟮男∈螅?5g~30g)已*性成熟,,在找不到雌性的情況下來追小的雄性小鼠(15g~18g)以獲得性的滿足。這豈不成了“同性戀”,?因此,,動物的日齡相差太大的不要放在同一個籠里,,以免發(fā)生上述現(xiàn)象。當(dāng)然,,一般而言,,一個籠子養(yǎng)多個動物的主要是小鼠、大鼠,、豚鼠,、金黃地鼠等小動物,像兔子,、狗一般都是一個籠子一只,。 剛開始一定要認(rèn)真仔細(xì)地觀察,這樣會有一些經(jīng)驗(yàn),。熟悉以后,,可以很迅速很準(zhǔn)確的分出來。對初學(xué)者而言,,我建議用第2種方法予以確認(rèn),。 一般提供商將動物送來時,都是已經(jīng)分好了雌雄的,。但我們?nèi)砸H自進(jìn)行確認(rèn),。一旦有一只混入異性群中,可能給實(shí)驗(yàn)帶來極大的影響,,甚至前功盡棄,。
第2種方法的示意圖如下:(不僅是大、小鼠,,也適合于兔,、豚鼠等的性別鑒定)
第三 、 實(shí)驗(yàn)動物的適應(yīng)性飼養(yǎng)
所謂適應(yīng)性喂養(yǎng),,是指實(shí)驗(yàn)動物由繁殖地或供應(yīng)商處搬到實(shí)驗(yàn)動物房以后,,在實(shí)驗(yàn)之前,為了使之適應(yīng)環(huán)境而喂養(yǎng)幾天的過程,。這一過程非常重要,,卻往往不受人重視。 這一過程一般至少為期三天,,是一周,。
為什么要進(jìn)行適應(yīng)性喂養(yǎng)?
1. 因?yàn)閯游飶囊粋€地方進(jìn)入到新的環(huán)境之后,,它們要自行調(diào)整一下,,才能適應(yīng),。就像中國隊(duì)員到外國踢足球要倒時差一樣,,動物們也要調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)。因?yàn)檫\(yùn)輸、轉(zhuǎn)移過程中,,動物原有的自身節(jié)律受到了影響,,需要恢復(fù)或適應(yīng)新的節(jié)律,。
2. 在適應(yīng)性喂養(yǎng)期間可密切觀察動物是否健康,?如果動物運(yùn)來之時就帶有疾病,則可能在此期間表現(xiàn)出來,。這讓我們對此有一個緩沖期,。不至于拿有病的動物匆匆忙忙在做實(shí)驗(yàn)。雖然不是所有有病的動物都在這幾天看得出來,,但這幾天確實(shí)給了我們一個重要的參考,。
怎樣使之適應(yīng)?
1. 配置好飼料,、飲水,、墊料,做好通風(fēng),,12h-12h明暗交替,。努力使之在“新家”舒服地過好日子。
2. 密切觀察其毛發(fā),、排泄物,、活動情況。這是考察動物是否有病的外在表現(xiàn),。
3. 注意與實(shí)驗(yàn)室原有飼養(yǎng)的動物隔開一定的距離,。其它動物的聲音、排泄的氨對新來的動物有一定的影響,。 如發(fā)現(xiàn)動物有個別狀態(tài)不佳者,,應(yīng)立即隔離,并分析原因,。有三分之一以上狀態(tài)不佳者,,高度懷疑動物有疾病。有死亡者,,高度懷疑此批動物有問題,。
適應(yīng)性喂養(yǎng),是保證實(shí)驗(yàn)成功的前提之一,。在此期間發(fā)現(xiàn)動物有病者,,應(yīng)更換別的批次動物。也有的是實(shí)驗(yàn)動物體重尚達(dá)不到實(shí)驗(yàn)所要求的大小,,這種情況下可適當(dāng)延長適應(yīng)性喂養(yǎng)的時間,。
第四,、實(shí)驗(yàn)動物的飼料,。
飼料是一個很重要的方面,。我們要了解常用實(shí)驗(yàn)動物基本的飼料組成。同時,,也要了解造一些疾病模型所需的飼料組份(如:高脂模型,,缺鐵性貧血模型等)。因此,,下面分普通飼料和特殊飼料兩部分來講,。
A 普通飼料
以常用的實(shí)驗(yàn)動物為例,我們來討論一下它們飼料的組成,。
一是小鼠,、大鼠的飼料。以玉米,、大豆,、麩皮、魚粉為主,,輔以復(fù)合維生素,、骨粉、微量元素,。一般做成長圓柱狀形,。或曰粗棒形,。直徑在1cm左右,。這樣的飼料又稱為顆粒飼料(本人覺得此名稱不妥,是否可稱為“條狀飼料‘,、“棒狀飼料”,?)。顏色一般為大豆黃色,。小鼠,、大鼠的飼料為全價(jià)飼料,即不需要再添加任何營養(yǎng)成分,。
二是豚鼠,、兔子的飼料。以苜蓿,、玉米,、大豆、麩皮,、魚粉為主,,輔以復(fù)合維生素,、骨粉、微量元素,。與小鼠,、大鼠的飼料相比,主要是苜蓿的比例達(dá)到了40%左右,。一般做成細(xì)長圓柱形,。或曰細(xì)棒形,。直徑在0.3cm左右,。顏色呈帶一點(diǎn)斑駁的青色。豚鼠,、兔子的飼料成份基本一樣,,只是比例略有不同,一般可以共用,。因二者不能自身合成維生素C,,所以苜蓿粉的比例較大。但,,飼料是加水潤濕后,,經(jīng)高溫高壓而制成,維C及酶類等已部分破壞,。豚鼠,、兔子飼料不是全價(jià)飼料。因此,,在飼料之外,,仍要加少許青菜或青草,否則有的狀態(tài)不佳甚至死亡,。本人也曾用在飲水中加維C片的方法,,但效果似不如直接給予青菜。
三是狗的飼料,。以肉粉,、玉米、大豆,、麩皮,、魚粉為主,輔以復(fù)合維生素,、骨粉,、微量元素。有膨化飼料,。一般要增加肉類食物,。
四是猴的飼料,。猴為雜食性。喂以混合精飼料并輔以蘋果,、葫蘿卜,。混合精飼料組成:玉米粉60%,谷粉20%,,面粉15%,,黃豆粉5%,,再加上骨粉,、魚粉、糖,、食鹽,、維生素等。幼齡動物通常要加上奶粉,。以前常以上述組分加水混合,,做成塊狀,烘干,,但現(xiàn)在有膨化顆粒飼料出售,。
對于小鼠,每日的飼料在4~8g,,大鼠在15~20g,;豚鼠在15~30g。兔在30~80g/kg/天,。注意他們的嚙齒類動物行為,,就是喜歡咬東西。因?yàn)樗鼈兊难例X終生生長,,于是它們要磨牙,。這樣,投予過多飼料它們也會浪費(fèi)掉,。兔雖屬兔型目,,但有類似嚙齒目動物的行為。
下圖中所示是一些實(shí)驗(yàn)動物飼料配方的百分比(%),。
B 特殊飼料
這里主要是指一些用于造模的飼料,。
1. 高脂飼料
這可能是zui常用的一種造模飼料。主要原理是通過外源性膽固醇,、三酯的攝入形成高血脂,、動脈粥樣硬化動物模型。zui常用的動物是大鼠,、兔,、金黃地鼠,。也有用其它動物的,但通常以糊劑,、乳劑灌胃來造模,。
下面我們來談?wù)劯咧暳系呐渲啤?/span>
常用配方:豬油 10% 雞蛋黃 5% 膽固醇 1~2% 丙基硫氧嘧啶 0.2% 普通飼料 82.8~83.8% 另可酌加膽酸鹽 0.2% 左右,維生素D3等,。
原理:豬油富含三酯,;雞蛋黃是天然食物中含膽固醇zui高的;丙基硫氧嘧啶有助于成模,,因甲狀腺素促進(jìn)膽固醇的分解,,而丙基抑制其作用;膽酸鹽主要是促進(jìn)膽固醇的吸收,;維生素D3主要是促進(jìn)動脈粥樣硬化形成,。
制法:膽固醇鱗片狀,研細(xì),;丙基研細(xì),;二者充分混合。取雞蛋煮熟,,剝?nèi)〉包S,,捏碎,吹干,,研成細(xì)粉,,與前二者混合好。如要加膽酸鹽,、維生素D3,,亦將其混合好。然后以“等量遞增法”將上述藥料加入到普通飼料粉末中,。再將豬油化開,,噴灑在飼料粉末之中混勻?;旌弥髧娺m量水為黏合劑,,加到制粒機(jī)中制成棒狀飼料。
在此,,特別提出“等量倍增法”,。因上述造模藥料與普通飼料的量相差懸殊,直接加入其中是難以混勻的,。這樣會造成以后動物攝入的造模的膽固醇,,三酯差異大,不利于實(shí)驗(yàn),。所謂“等量遞增法”就是:將上述藥料入差不多相等的普通飼料粉末充分混勻,;得混合物后,,再加與此混合物相等量的普通飼料混合,充分混勻,;如此類推,。比如:藥料為200g,*次混合后即為400g,,第二次混合后為800g…這樣就成倍地混合好,。因此,又稱為“等量倍增法”,。因?yàn)橄嗟攘康牟煌镔|(zhì)混合時,,相互混入對方的機(jī)率zui大,zui容易混勻,。學(xué)過藥劑的朋友們是非常熟悉的,,這在中藥的散劑中就是這樣做的。沒學(xué)過這個方法的朋友要特別關(guān)注,。
目前有些飼料供應(yīng)商稱可以提供現(xiàn)成的高脂飼料。一則他們很多根本就是胡亂地加入其中的,,極不均勻,,嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)。二則他們做的飼料中造模藥的比例不一定符合你的要求,。很少有人懂得“等量倍增法”的原理及實(shí)用價(jià)值,。因?yàn)槟壳帮暳闲袠I(yè)中專業(yè)人士多不會在一線,而是做管理工作,。做飼料的多是沒有專業(yè)知識,,而只是稍加培訓(xùn)甚至沒有培訓(xùn)的普通工人。當(dāng)然,,“等量倍增”的做法很簡單,,關(guān)鍵是要有這樣的專業(yè)意識。做此飼料時,,全程跟蹤,,這樣才會對實(shí)驗(yàn)結(jié)果心中有數(shù)。
在此,,我一而再,,再而三地強(qiáng)調(diào)“等量倍增法”配制飼料,就是為了站友們減少在此類實(shí)驗(yàn)中的誤差,。因?yàn)?,有人問我,為什么他們的高脂組有些動物的血脂幾乎跟正常組沒有顯著差異,,而有的又高很多,,標(biāo)準(zhǔn)差如此地大,?我*時間想到的就是飼料的配制是否有問題。如果飼料沒配好,,實(shí)驗(yàn)可能前功盡棄,。 因此,不厭其煩地說兩句:高脂飼料要親自配,,且按要求,、按科學(xué)規(guī)律配(等量倍增法)。 飼料成形后,,要攤開置通風(fēng)處吹干,,或以電風(fēng)扇吹干。不要受熱,。在春夏之季,,尤應(yīng)注意。因其中含有脂肪油類,,且因制飼料時要經(jīng)過高溫壓制,,放在一起易發(fā)熱、生霉,。有人置冰箱保存,,實(shí)不妥。一則冰箱容量有限,;二則飼料中的水分未盡,,出冰箱后,冰化,,更易生霉,,且動物不是太喜歡吃冷藏后的飼料。一次配制飼料不宜過多,。一般可配實(shí)驗(yàn)全程所需飼料的一半,。后半段根據(jù)前面所消耗的實(shí)際量來酌性增減。但需給足量,,寧多一點(diǎn),,不能少。 高脂飼料比普通飼料要軟,,易碎,。要注意輕拿輕放。底部碎屑可收集起來,,再壓制成型,。
2. 缺鐵性貧血飼料
3. 缺鋅飼料
第五、實(shí)驗(yàn)動物的飲水
下面我來介紹一下實(shí)驗(yàn)動物飲用水的要求,以及飲水器具,。
A 飲用水
實(shí)驗(yàn)動物級別的不同,,飲用的水也不同。 通常情況下,,普通級動物飲水達(dá)到生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)即可,。 清潔級、SPF要求滅菌,??筛邷馗邏簻缇部梢约哟温人徕c,,或以鹽酸調(diào)PH到2.5~3.0,。后者又稱之為酸化水。 無菌動物飲水只能高溫高壓滅菌,。