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貼壁細胞的消化方法2022/12/16
如何消化讓細胞生長的更好,，養(yǎng)細胞關(guān)鍵還是在消化，以下介紹幾種細胞的消化方法一,、酶消化法1,、胰酶，這是用得最多的,。一般濃度在0.25-0.5%,。消化的時間根據(jù)細胞種類、操作手法,，溫度等因素而變化,，從幾分...
細胞培養(yǎng)如何選擇血清2022/12/16
體外培養(yǎng)的細胞直接生活在培養(yǎng)基中，因此培養(yǎng)基需要滿足細胞對營養(yǎng)成分,、促生長因子,、激素、滲透壓,、pH等諸多方面的要求,；原代提取的時候選擇如何選擇培養(yǎng)基成了關(guān)鍵的問題，此外在細胞提取的時候因血清可以模擬個...
染色體制備2022/12/13
原理固定阻滯于分裂中期的細胞,，在低滲液中膨脹,，將細胞滴在載玻片上，染色,，觀察[RothfelsａndSiminovitch,，1958；RooneyａndCzepulkowski,，1986],。材料與儀器...
染料攝取法測定細胞生存力實驗2022/12/13
原理細胞懸液用碘化丙啶和二乙酰熒光素的混合液染色，用熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測,。材料與儀器步驟材料無菌單細胞懸液雙醋酸熒光素,，10ug/ml，溶于HBSS碘化丙啶,，500ug/ml非滅菌熒光顯微鏡濾光...
染料排斥法測定細胞生存力實驗2022/12/13
原理萘黑,、臺盼藍以及很多其他染料[KahenbachetaL1958]均不能透過活細胞。將細胞懸液與染料混勻,，在低倍顯微鏡下檢査,。材料與儀器胰蛋白酶巴斯德吸管顯微鏡手執(zhí)計數(shù)器生存力染料血細胞計數(shù)板步驟...
前列腺上皮2022/12/13
原理取出前列腺和處理標本（30min）,，用膠原蛋白酶消化前列腺組織（1h），收集單個細胞和小的細胞團（1h）,。接種細胞,，培養(yǎng)至形成單層（7d）。材料與儀器胎牛血清或馬血清青霉素卡那霉素霍亂毒索地塞米松...
瓊脂中克隆培養(yǎng)2022/12/13
原理溫度高時瓊脂呈液態(tài),，但在37℃時成凝膠狀態(tài),，細胞懸浮在溫暖的瓊脂凝膠培養(yǎng)基中，待瓊脂形成凝膠后進行培養(yǎng),，形成散在集落,，很容易分離。材料與儀器Noble瓊脂Difco胎牛血清兩倍濃度培養(yǎng)基生長培養(yǎng)基...
分離原代人角膜間質(zhì)細胞2022/12/9
原理材料與儀器完整的人角膜CMF-SaIineG中性蛋白酶IIL型膠原酶1mgml在DMEMF-12GASP中CMF-SaIineG配制的TrypLEExpress或0.25%膜蛋白酶DMEMF-12...
平滑肌細胞的分離和培養(yǎng)2022/12/9
料與儀器0.25%胰蛋白酶和EDTA混合液平滑肌培養(yǎng)液Petri培養(yǎng)皿手術(shù)刀和10號手術(shù)刀片解剖剪組織鑷步驟1.從小牛取胸主動脈,。2.將胸主動脈浸入Hanks液,。3.分離細胞之前將動脈放在冰上。4.將...
淋巴細胞的分離2022/12/9
原理通過右旋糖酐促沉降作用去除紅血細胞后,，將枸櫞酸或肝素抗凝的全血或血漿層加在致密的Ficoll-Hypaque層上面,。離心后，大部分淋巴細胞位于Ficoll-Hypaque和血漿之間的界面,。材料與儀...
冷胰蛋白酶解離組織2022/12/9
原理剪碎的組織放在胰蛋白酶中于4°C放置16~18h,，去除胰蛋白酶后溫育并于溫培養(yǎng)基中分散細胞。材料與儀器組織DBSS粗制胰蛋白酶生長培養(yǎng)基皮氏平皿培養(yǎng)瓶鑷子移液管錐形瓶剪刀冰浴步驟1.將組織（1~5...
昆蟲細胞的擴增2022/12/7
原理用機械法從細胞單層分離細胞,，在27°C條件下和懸浮狀態(tài)下進行擴增培養(yǎng),。材料與儀器Sf9細胞二甲基亞砜PluronicF68生長培養(yǎng)液培養(yǎng)瓶旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶和磁力攪拌器27°C培養(yǎng)箱步驟常規(guī)維持培養(yǎng)1.通...
結(jié)腸直腸腫瘤細胞的培養(yǎng)2022/12/7
原理通常用酶消化腺瘤，用手術(shù)刀片將癌組織切碎,。如果分化良好的結(jié)腸直腸癌標本切開后仍不易分離細胞,，可用酶消化方法分離。材料與儀器用于傳代培養(yǎng)的Dispase生長培養(yǎng)液洗液消化液培養(yǎng)瓶步驟一,、酶消化1.用...
口腔角質(zhì)形成細胞2022/12/7
材料與儀器D-PBSA0.17%胰蛋白酶PET轉(zhuǎn)運培養(yǎng)液生長培養(yǎng)液含抗菌素的生長培養(yǎng)液手術(shù)刀和11號刀片眼科剪眼科鑷2把50mm或100mm培養(yǎng)級Petri培養(yǎng)皿35mm和100mm非培養(yǎng)級Petri...
膠原酶解離組織2022/12/7
原理切碎的組織放于含有膠原酶的完-全培養(yǎng)基中孵育,，組織分解后，通過離心去除膠原酶,，高濃度接種,、培養(yǎng)。材料與儀器膠原酶DBSS培養(yǎng)基移液器皮氏平皿培養(yǎng)瓶離心管手術(shù)刀離心機步驟1.將組織移人新鮮,、無菌的D...
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