1. 將 2× 104~ 5× 104 個(gè)細(xì)胞 /ml （4× 103~ 1× 104 個(gè)細(xì)胞 /cm2） 20 ml 在 75 cm2 的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),。

2. 約 3.5 天后，細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí),，將 0.2 ml 的 1×10-5 mol/L 的秋水仙酰胺（用 D-PBSA 配制）加入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)已有的培養(yǎng)基中,，終濃度 1×10-7 mol/L 。

3. 4~6 小時(shí)后,，輕輕去掉培養(yǎng)基,，加 5 ml 0.25% 胰蛋白酶，孵育 10 min,。

4. 在胰蛋白酶液中離心細(xì)胞,，棄掉上清胰蛋白酶。

5. 以 5 ml 低滲溶液（0.04 mol/L KCl ; 0.025 mol/L 枸櫞酸鈉）重新混懸細(xì)胞,，37℃ 下靜置 20 min ,。

6. 加入等量新鮮配制的冰冷的醋酸甲醇（一份冰醋酸加三份無(wú)水甲醇或乙醇，新鮮配置并在冰上保存）,，不停地混合,，然后以 100 g 速度離心 2 min,。

7. 棄掉上清混合物，在渦流混懸器上震蕩細(xì)胞團(tuán)塊,，再慢慢邊混勻邊加新制備的醋酸甲醇,。

8. 細(xì)胞在冰上靜置 10 min。

9. 以 100 g 速度離心細(xì)胞 2 min ,。

10. 棄掉上清醋酸甲醇,，以 0.2 ml 的醋酸甲醇溶液，重新振蕩混懸細(xì)胞團(tuán),，直到細(xì)胞均勻分散,。

11. 用吸管吸一滴細(xì)胞懸液到吸管尖部，從約 12 英寸（30 cm）處滴到?jīng)龅牟Ｆ?，傾斜玻片，讓液滴流下并鋪開(kāi),。

12. 將玻片在燒杯沸水上迅速干燥,，然后用相差顯微鏡觀(guān)察。如果細(xì)胞均勻鋪展而沒(méi)有相互接觸,，則以同樣濃度的細(xì)胞制備更多片子,。如果細(xì)胞成堆重疊出現(xiàn)，則稀釋?xiě)乙?2~4 倍之后,，再制備一張滴液玻片,。如果滿(mǎn)意，就制備更多片子,，若不滿(mǎn)意,，重復(fù)這一步驟進(jìn)一步稀釋。

13. 進(jìn)行 Giemsa 細(xì)胞染色：

(a)將玻片放在架子上,，架子放在水池上,。

(b)以數(shù)滴純 Giemsa 染液完-全覆蓋玻片，染色 2 min ,。

(c)以約 10 倍體積的水淹沒(méi)玻片,。

(d)再靜置 2 min。

(e)用流動(dòng)水沖掉稀釋過(guò)的染液,。

(f) 最后用水逐張沖洗玻片去除染液沉淀,。

(g)顯微鏡下觀(guān)察染色情況，如果滿(mǎn)意,，則將載玻片徹-底干燥,，用#00蓋玻片及 DPX 或 Pennoum 封片。

注意事項(xiàng)

必須倒掉染色液,，因?yàn)檠趸娜旧焊≡鼤?huì)留在玻片上,。即使在平皿中染色,，染液也不能倒掉，而必須用水從下向上置換掉,。

以上就是本期的內(nèi)容,，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊,。

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