如何消化讓細(xì)胞生長的更好,，養(yǎng)細(xì)胞關(guān)鍵還是在消化,，以下介紹幾種細(xì)胞的消化方法

一,、酶消化法

1,、胰酶,，這是用得最多的。一般濃度在0.25-0.5%,。消化的時間根據(jù)細(xì)胞種類,、操作手法，溫度等因素而變化,，從幾分鐘到幾十分鐘不等,。0.25%的胰酶，37℃一般在消化單層貼壁的細(xì)胞一般1-5分鐘就足夠了,，用血清或者含血清的完-全培養(yǎng)基終止,。

2、膠原酶,，一般用于原代細(xì)胞消化,，這種方法作用溫和，對細(xì)胞損傷較小,，消化的時間也略長,，不推薦的原因是膠原酶有點小貴而且培養(yǎng)細(xì)胞株感覺沒有多大的必要。

二,、離子螯合劑

不破壞細(xì)胞表面分子,，僅與CAMs螯合，因此,，如果檢測細(xì)胞表面分子的話,，盡量,，甚至是一定不要用酶消化法。

1,、EDTA,，一般濃度在0.02%左右，使用它來消化細(xì)胞時,，注意它能顯著影響pH值,，而且在弱堿性條件下才易溶，而且它不能被終和,，因此,，消化下來的細(xì)胞一定要洗一遍。

三,、物理法

直接吹打或用細(xì)胞刮刀,，貼壁很牢的細(xì)胞可以使用這個方法，吹打和刮刀都會給細(xì)胞造成嚴(yán)重的損傷,，建議不到萬不得已不要使用此法,。

四、冷凍法

采用細(xì)胞冷凍后收縮的原理,，從而使細(xì)胞從培養(yǎng)瓶上脫落,。優(yōu)點：對細(xì)胞損傷小，不需要中止或洗細(xì)胞,，方便,，不需要另外配制消化液。特別適用那些貼壁不是特別緊,，又特別嬌氣的細(xì)胞,。缺點：細(xì)胞常成小片脫落，重新鋪板后細(xì)胞生長會有點聚團,。常用于間充質(zhì)干細(xì)胞、DC細(xì)胞的消化,，具體過程是：1,、用較多的4℃的PBS洗滌一遍細(xì)胞，再加入適量的 4℃的PBS,，靜置操作臺上,，很快細(xì)胞受冷皺縮小片脫落，3,、輕輕吹打,，細(xì)胞即完-全脫落，4,、按一定比例傳代,。

細(xì)胞消化難題：

1,，成團、絮狀：

消化液里加入edta可以減少細(xì)胞成團的現(xiàn)象,，血清可以終止胰酶的作用,，越好的血清使用的效價更高，用胰酶消化后加血清終止,，如果消化液中加入了edta的話,，就要將消化液倒干凈，如果細(xì)胞貼壁要求不是很嚴(yán)格的話,，一般不需要進行離心,。

比如說4T1細(xì)胞，這種細(xì)胞的貼壁能力天生很強,，用0.5%胰酶(含0.1%EDTA)一般要消化10~12min,。用PBS洗滌時要洗凈殘余的培養(yǎng)基，加入胰酶后在培養(yǎng)箱中消化(避免細(xì)胞室溫下受損以及在此溫度時胰酶活性最-強)至細(xì)胞收縮變圓(可顯微鏡下觀察)且有少許細(xì)胞脫落(呈流沙狀),，隨后立即棄去胰酶(如果脫落的細(xì)胞很多且需要大量細(xì)胞實驗,，則不能棄去胰酶)，加入培養(yǎng)基輕輕彈散(不能用無血清培養(yǎng)基或者PBS替代,，否則細(xì)胞聚集成團塊或絮狀),。

也可以用2%利多-卡因消化5-8分鐘，然后再棄去,。

消化過度怎么辦,？

馬上用培養(yǎng)基中和，收集全部的細(xì)胞到無菌的離心管中800RPM 3分鐘,。棄上清,，用全培重懸，換新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng),，狀態(tài)不好的細(xì)胞在培養(yǎng)的過程中會死亡脫落,，在換液的時候可以清除掉。