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  • 細胞凋亡的早期檢測方法有哪些,?

    1,、PS(磷脂酰絲氨酸)在胞外膜分布的檢測PS從胞膜內側轉移到外側現(xiàn)象是在細胞凋亡的早期即可發(fā)生標志,。AnnexinV是一種鈣依賴性的磷脂結合蛋白,,能專一性的結合暴露在胞膜外側的PS,,使用熒光素標記的AnnexinV蛋白(如AnnexinV-FITC)即可檢測細胞凋亡,。由于這是一種凋亡早期的活細胞檢測(懸浮細胞和貼壁細胞都適用),,可與DNA染料或別的晚期檢測方法相結合來標記凋亡的發(fā)展階段。操作簡便快速,,10分鐘就可完成檢測,。靈敏度高,可作為流式方法分析凋亡細胞的基礎,。2,、細胞內氧化還原狀態(tài)改變的
  • 微生物菌種冷凍干燥和液氮保藏菌種技術

    微生物菌種冷凍干燥和液氮保藏菌種技術-,、安瓶管開封1.用浸過70%酒精的脫脂棉擦凈安瓿管,。2.用火焰將安瓿管頂端加熱。3.滴無菌水至加熱的安瓿管頂端使玻璃開裂,。4.用挫刀或鑷子敲下已開裂的安瓿管的頂端,。二、菌株恢復培養(yǎng)1.用無菌吸管,,吸取0.3~0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基,,滴人安瓿管內,輕輕振蕩,,使凍于菌體溶解呈懸浮狀,。2.取0.1~0.2ml菌體懸浮液,移植于適宜的瓊脂斜面/平板培養(yǎng)基上,,剩余的菌液,,注入適宜的液體培養(yǎng)基內,然后在建議的溫度下培養(yǎng),。3.若未能活化,或活化后有疑問時,,請于收到菌種
  • 上皮細胞的培養(yǎng)方法

    上皮細胞的培養(yǎng)方法上皮細胞包括腺上皮是很多器官如肝,、胰、乳腺等的功能成分,又由于癌起源于上皮組織,故上皮細胞培養(yǎng)特別受到重視.但上皮細胞培養(yǎng)中常混雜有成纖維細胞,培養(yǎng)時生長速度往往超過上皮細胞,并難以純化,同時上皮細胞難以在體外長期生存,因此純化和延長生存時間是培養(yǎng)關鍵.體內上皮細胞生長在膠原構成的基膜,因此培養(yǎng)在有膠原的底物上可能利于生長,另外人或小鼠表皮細胞培養(yǎng)在以3T3細胞為飼養(yǎng)層(用射線照射后)時,細胞易生長并可發(fā)生一定程度的分化現(xiàn)象.降低PH,、Ca2+含量和溫度,向培養(yǎng)基中加入表皮生長
  • 細胞的純化的兩種方法

    細胞的純化的兩種方法細胞的純化一般分為兩種,即自然純化很人工純化.常用的純化方法有,酶消化法,細胞因子依賴純化法,機械刮除法,反復貼壁法,電烙篩選法.體外培養(yǎng)的細胞源于人或動物或胚胎組織,體內的細胞都是混雜生長,每一種組織都有血管和間葉組織,因此,來源于上述組織的培養(yǎng)材料的原代細胞,、傳代細胞絕大多數(shù)都呈混合生長,既有上皮樣細胞又有纖維樣細胞,纖維樣細胞又包括成纖維細胞、肌細胞,、骨細胞,、滑膜細胞等,混雜的細胞會直接影響實驗結果,而利用體外培養(yǎng)細胞進行實驗研究時,為了保證實驗結果的可靠性、一致性,、穩(wěn)
  • T淋巴細胞轉化實驗的基本原理

    T淋巴細胞轉化實驗的基本原理T細胞在體外培養(yǎng)時,受到非特異性有絲分裂原(如PHA,、ConA)刺激后,可出現(xiàn)細胞體積增大,代謝旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母細胞轉化.淋巴細胞轉化率的高低可以反映機體的細胞免疫水平,因此可作為測定機體免疫功能的指標之一.T細胞在體外培養(yǎng)時,受到非特異性有絲分裂原(如PHA、ConA)刺激后,可出現(xiàn)細胞體積增大,代謝旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母細胞轉化.淋巴細胞轉化率的高低可以反映機體的細胞免疫水平,因此可作為測定機體免疫功能的指標之一.淋巴細胞轉化試驗
  • 細胞的復蘇及凍存方法

    細胞的復蘇及凍存方法一.細胞復蘇與培養(yǎng)將液氮或-80℃保存的腫瘤細胞于37℃水浴,,快速溶化,,用8.0ml培養(yǎng)基混勻已融化的腫瘤細胞懸液,于1500轉/分,,離心3分鐘,。棄上清,再吸取8.0ml培養(yǎng)基質混勻細胞沉淀,,再1500轉/分,,離心3分鐘,棄上清,,細胞沉淀用1.0ml培養(yǎng)基混勻,備用,。另取一個75cm2方瓶,,加入14.0ml培養(yǎng)基質,將上述制備的含腫瘤細胞懸液(1.0ml)加入此方瓶中,,于37℃,5%CO2孵育箱中培養(yǎng),。若此腫瘤細胞懸浮生長,大約3-4天細胞基質會變黃,,5.0ml細胞懸液可傳代
  • 影響細胞生長的幾點因素

    影響細胞生長的幾點因素,摘要:細胞在體外進行培養(yǎng),失去了機體的調節(jié)和控制,因此,除滿足營養(yǎng)的要求外,還必須使細胞生存環(huán)境晝接近活體的環(huán)境.外環(huán)境的培養(yǎng)條件如溫度,、滲透壓、酸堿度等均能影響細胞的生長.一,、溫度:一般哺乳類及禽類細胞體外培養(yǎng)的適宜溫度是37~38℃.溫度過高或過低都會影響到細胞的生長.細胞耐受低溫的能力比抗熱的能力強,在低溫下,細胞的代謝活力及核分裂降低.溫度低于0℃時,雖影響細胞代謝,但并無傷害作用.把細胞置于23~25℃時,細胞仍能生存和生長,但速度減緩,不過,魚類細胞的適宜培養(yǎng)
  • 細胞培養(yǎng)常見問題解答

    1冷凍管應如何解凍?取出冷凍管后,,須立即放入37°C水槽中快速解凍,,輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化,并注意水面不可超過冷凍管蓋沿,,否則易發(fā)生污染情形,。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時,必須注意安全,,預防冷凍管之爆裂,。2細胞冷凍管解凍培養(yǎng)時,是否應馬上去除DMSO?除少數(shù)特別注明對DMSO敏感之細胞外,,絕大部分細胞株(包括懸浮性細胞),,在解凍之后,應直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中,,待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO即可,,如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題。3可否使用與
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