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一、熱原(progon)醫(yī)院臨床在使用藥品注射劑時,，常有發(fā)生冷感,、寒戰(zhàn)、發(fā)熱,、頭痛,、惡心,、嘔吐、膚色灰白,、休克,、嚴(yán)重時導(dǎo)致死亡，這種癥狀稱為熱原反應(yīng),。為提高藥品質(zhì)量和用藥安全,，人們對熱原進(jìn)行了廣泛的研究，直到1923年Seibert提出了用家兔檢測熱原的方法,。在1942年美國藥典首先將家兔熱原檢查項收入藥典成為法定方法,，中國藥典1953年版開始收載該方法，隨后的世界各國藥典都以動物熱原檢查法作為藥品質(zhì)量監(jiān)測的方法之一,。家兔熱原檢查法的優(yōu)點,，可在規(guī)定時間里觀察到家兔的體溫變化，相應(yīng)反應(yīng)了熱原質(zhì)引起
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細(xì)菌內(nèi)毒素,，英文稱作Enolotoxin,，是G-菌細(xì)胞壁個層上的*結(jié)構(gòu)，內(nèi)毒素為外源性致熱原,，它可激活中性粒細(xì)胞等,，使之釋放出一種內(nèi)源性熱原質(zhì)，作用于體溫調(diào)節(jié)中樞引起發(fā)熱,。內(nèi)毒素的主要化學(xué)成分為脂多糖中的類脂A細(xì)菌內(nèi)毒素這個概念在1890年的時候就已被提了出來,，它是在研究發(fā)熱物質(zhì)過程所引成的，1933年Boivinzui先由小鼠傷寒桿菌提取出來,，進(jìn)行化學(xué)免疫學(xué)方面的研究,，到1940年時候，Morgan使用志賀氏痢疾菌闡明了細(xì)菌內(nèi)毒素是由多糖脂質(zhì)及蛋白質(zhì)三部分所組成的復(fù)合體,，到了1950年以后,，隨
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實驗原理帶電荷的蛋白質(zhì)，在電場中向著與其所帶電荷電性相反的電極泳動稱為電泳,。血清中各種蛋白質(zhì)的等電點不同,，但大都在pH7以下，若將血清置于pH8.6的緩沖液中,，則這些蛋白質(zhì)均帶負(fù)電,，在電場中都向陽極移動。由于各種蛋白質(zhì)在同一pH環(huán)境中所帶負(fù)電荷多少及分子大小不同,，所以在電場中向陽極泳動速度也不同,。蛋白質(zhì)分子小而帶電荷多者，泳動速度快；反之,，則泳動速度慢,。因此可將血清蛋白質(zhì)依次分為清蛋白、a1-球蛋白,、a2-球蛋白,、b-球蛋白和g球蛋白五條區(qū)帶，經(jīng)染色可計算出各血清蛋白質(zhì)含量的百分?jǐn)?shù),。以醋酸纖維薄
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實驗試劑TotalRNAKit：Omega：(Cat.No．R6834)FirstStrandcDNASynthesisKit：GeneCopoeia(Cat.No．C0210A)2xAllinOneTMQ-PCRMix：GeneCopoeia（cat.No．D0101A)Primersynthesis：invitrogen實驗設(shè)備RealTimePCR：ABI實驗材料樣品為5個人源的細(xì)胞培養(yǎng)液,，其編號分別為：NO.I、No.2,、No.3,、No.4、No.5,，其中為對照組,，其它四個為不同的樣品組
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實驗原理1.DNA段回收方法：DN片段在適當(dāng)濃度的瓊脂糖凝膠中，通上一定電壓進(jìn)行電泳,，不同大小的DNA分子由于遷移率的不同而分離開,。切下帶有所需DN片段的凝膠，用凍融法,、玻璃奶回收法或商品化膠回收試劑盒將目的片段回收純化,。2.利用Taq酶能夠在PCR產(chǎn)物的3’末端加上一個非模板依賴的A，而T載體是一種帶有3’T突出端的載體,，在連接酶作用下，可以把PCR產(chǎn)物插入到質(zhì)粒載體的多克隆位點,，可用于PCR產(chǎn)物的克隆和測序,。實驗試劑1.pMDTM18-TSimpleVectorKit(Takara公司)2.
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實驗步驟首先引物與模板的序列要緊密互補，其次引物不能在模板的非目的位點引發(fā)DNA聚合反應(yīng)(即錯配),，再次引物與引物之間避免形成穩(wěn)定的二聚體或發(fā)夾結(jié)構(gòu),。引物設(shè)計應(yīng)注意如下要點：1．引物的長度一般為15-30bp，常用的是18-27bp,。2．引物序列在模板內(nèi)應(yīng)當(dāng)沒有相似性較高,，尤其是3’端相似性較高的序列，否則容易導(dǎo)致錯配,。引物3’端出現(xiàn)3個以上的連續(xù)堿基,，如GGG或CCC，也會使錯誤引發(fā)機(jī)率增加,。3．引物3’端的末位堿基對Taq酶的DNA合成效率有較大的影響,。不同的末位堿基在錯配位置導(dǎo)致不同的擴(kuò)增
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大腸桿菌亮氨酞-tRNA合成酶的E292對氨基酞化活性的作用
實驗試劑1.L-Leucine，ATP，DTT,，焦磷酸鈉(tetrasodiumpyrophosphate)和HA-Ultrogel購自美國Sigma公司,。2.[32p]-焦磷酸鈉購自美國杜邦公司。3.L-[I4C]-亮氨酸和DEAE-SepharoseTMFastFlow購自英國Amersham公司,。4.限制性內(nèi)切酶和T4DNA連接酶購自立陶宛MBIFerments公司,。5.質(zhì)粒pTrc-99B。實驗材料大腸桿菌LeuRS從高表達(dá)大腸桿菌菌株中純化得到實驗步驟1.突變體LeuRS基因的構(gòu)建以構(gòu) -
實驗試劑氯仿[重慶川東化工集團(tuán)有限公司]異丙醇[重慶川東化工集團(tuán)有限公司]無水乙醇[重慶川東化工集團(tuán)有限公司]異戊醇[上?；瘜W(xué)試劑有限公司]溴酚藍(lán)[上海三愛思試劑有限公司]二甲苯氰FF[AmerscoCo.]溴化乙錠[AmerscoCo.]飽和酚(pH7.0)[Tianjin,H&YBio.Co.Ltd]TaqDNA聚合酶[Tianjin,H&YBio.Co.Ltd]十二烷基肌氨酸鈉[Tianjin,H&YBio.Co.Ltd]十二烷基硫酸鈉[Tianjin,H&YBio.Co.Ltd]三輕甲基
