靶向蛋白定量：PRM技術(shù)如何在多肽水平實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)分析,？檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

dànbáizhì組學(xué)研究中，如何對感興趣蛋白進(jìn)行準(zhǔn)確,、可重復(fù)的定量分析,，是疾病機(jī)制解析、藥物靶點(diǎn)確認(rèn)及臨床轉(zhuǎn)化研究的關(guān)鍵需求,。而由于dànbáizhì復(fù)雜性及其表達(dá)水平的高度動態(tài)范圍,，直接進(jìn)行dànbáizhì層面定量往往面臨巨大挑戰(zhàn)。因此,，多肽層面的定量策略成為主流路徑,。PRM技術(shù)（Parallel Reaction Monitoring）作為bǎxiàngdàn白定量質(zhì)譜分析的重要工具，憑借其高選擇性與高靈敏度,，正在多肽層面實(shí)現(xiàn)qiánsuǒwèiyǒu的jīngzhǔn定量,。本文將系統(tǒng)闡述PRM技術(shù)在多肽定量中的關(guān)鍵機(jī)制、技術(shù)優(yōu)勢與優(yōu)化路徑,，并介紹百泰派克生物科技的解決方案,。

一、PRM技術(shù)多肽水平定量的基本原理

dànbáizhì經(jīng)酶解后轉(zhuǎn)化為一系列肽段,，這些肽段作為特征性離子,，代表其來源蛋白的表達(dá)水平。多肽層面的定量,，實(shí)質(zhì)上是通過質(zhì)譜技術(shù)對特定肽段進(jìn)行選擇性檢測,，并以其峰面積或強(qiáng)度為基礎(chǔ)進(jìn)行定量推斷,。

關(guān)鍵點(diǎn)包括：

（1）選擇代表性肽段（proteotypic peptides）,，需具備dútè性、高響應(yīng)性和穩(wěn)定性,。

（2）確保肽段在不同樣本中酶解效率一致,，且無翻譯后修飾干擾,。

（3）利用穩(wěn)定同位素標(biāo)記肽（SIL peptides）作為內(nèi)標(biāo)校準(zhǔn)，有效消除樣本間及儀器漂移造成的偏差,。

二,、PRM技術(shù)在多肽定量中的原理與優(yōu)勢

PRM是一種基于高分辨率質(zhì)譜儀（如Orbitrap）實(shí)現(xiàn)的bǎxiàngdàn白定量掃描技術(shù)，其核心優(yōu)勢在于：

1,、全碎片離子監(jiān)測：相比SRM需預(yù)設(shè)1~2對transition,，PRM可同時采集所有碎片離子，提高特異性與定量靈活性,。

2,、高分辨率降低干擾：通過jīngquè質(zhì)量篩選（通常為0.005~0.01 Da），有效過濾背景噪聲,，保障低豐度肽段的檢測準(zhǔn)確性,。

3、后處理可調(diào)整定量策略：研究者可根據(jù)數(shù)據(jù)質(zhì)量靈活選擇zuì佳定量離子,，提高結(jié)果穩(wěn)定性,。

三、影響多肽定量精度的關(guān)鍵因素

1,、肽段選擇與合成：應(yīng)避免肽段中含有修飾位點(diǎn),、錯義氨基酸或易降解序列。

2,、內(nèi)標(biāo)肽設(shè)計(jì)與添加：內(nèi)標(biāo)肽需嚴(yán)格匹配目標(biāo)肽序列,，僅在末端引入同位素標(biāo)簽；添加時機(jī)應(yīng)在酶解前,，確保全過程校準(zhǔn),。

3、色譜分離性能：良好的峰形和保留時間穩(wěn)定性是實(shí)現(xiàn)線性定量的基礎(chǔ),。

4,、質(zhì)譜參數(shù)設(shè)置：包括孤立窗口（1~2 Da）、zuì大注入時間,、掃描周期等,，均需優(yōu)化至靶標(biāo)響應(yīng)zuì佳。

5,、背景抑制與信號強(qiáng)化：采用多階段洗脫,、梯度優(yōu)化、離線分級（如SPE）以減少共洗脫干擾,。

四,、PRM vs SRM/MRM：在多肽定量中的對比優(yōu)勢

百泰派克生物科技搭建了基于Orbitrap Exploris 480的PRMbǎxiàngdàn白定量平臺，具備以下核心技術(shù)能力：

1、高通量靶點(diǎn)篩選服務(wù)：結(jié)合DIA數(shù)據(jù)與in silico預(yù)測,，構(gòu)建靶標(biāo)肽段候選庫,。

2、SIL肽定制與質(zhì)量控制體系：支持多肽級穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)定制,，嚴(yán)格驗(yàn)證純度與定量準(zhǔn)確性,。

3、自動化PRM技術(shù)開發(fā)流程：依托Skyline平臺,，實(shí)現(xiàn)從靶標(biāo)選擇到參數(shù)優(yōu)化的全流程標(biāo)準(zhǔn)化,。

4、復(fù)雜樣本適配能力：可處理血漿,、組織勻漿,、腦脊液等高背景樣本，提供多維富集與清潔化方案,。

多肽定量的智能化發(fā)展路徑 隨著機(jī)器學(xué)習(xí)算法與AI輔助方法的引入,，未來PRM數(shù)據(jù)處理將更加智能化：

1、自動識別zuì佳定量離子組合

2,、動態(tài)調(diào)整采集窗口提升靈敏度

3,、多樣本跨批次標(biāo)準(zhǔn)化分析

此外，結(jié)合中等通量自動化平臺與多肽靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫,，將加速疾病標(biāo)志物的驗(yàn)證效率,，為jīngzhǔn醫(yī)學(xué)研究提供高質(zhì)量證據(jù)支持。PRM技術(shù)已成為多肽層面jīngzhǔnbǎxiàngdàn白定量的重要手段,，尤其在面對低豐度,、復(fù)雜背景與高重復(fù)性要求的科研場景中表現(xiàn)出顯著優(yōu)勢。百泰派克生物科技將繼續(xù)以zhuānyè的質(zhì)譜平臺與定制化服務(wù),，助力科研客戶實(shí)現(xiàn)更高精度,、更強(qiáng)可重復(fù)性的bǎxiàngdàn白定量分析。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一,、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進(jìn)行分析,，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù)，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,，Nduāncèxù,，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù),。對于未知理論序列的dànbáizhì,，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù)，對蛋白序列進(jìn)行分析,。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.采用目前世界上*的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達(dá) 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液,、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響,。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC,，提供定量dànbáizhì組學(xué),、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué),、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù),。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù),，助力微量樣本蛋白組學(xué),、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析,，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法,，適用于分析組織、細(xì)胞,、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高,，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析,，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確,。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析,，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子,，然后用流式細(xì)胞原理分離單個細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個細(xì)胞的原子質(zhì)量譜,，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號分子表達(dá)量,。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.技術(shù)*，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù),，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題,。可在單細(xì)胞層面上對多種指標(biāo)同時進(jìn)行表征,，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標(biāo)蛋白,。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制,，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右,，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級的提高,，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq,。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景,；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會有新應(yīng)用方向,。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾,；

③可檢測細(xì)胞存活率,、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量,、DNA合成速率以及蛋白酶活性等,。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的,、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案,。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析,，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識別和定量,。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥,、免疫疾病及傳染病的解決方案,，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五,、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù),，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù),，提供一系列完善的生物藥物分析方案,，從dànbáizhì、多肽,、抗體,、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析,。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù),，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征,，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù),。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH,、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則,，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系,，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份,，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查,，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù),，支持新藥研發(fā),、藥物申報(bào)注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系,，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù),；

2.獲國家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù),；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué),、多肽組學(xué),、代謝組學(xué),、生物藥物表征、單細(xì)胞分析,、單細(xì)胞質(zhì)譜流式,、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺,，滿足您一站式服務(wù)需求,；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇,；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

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