Top-Down質(zhì)譜如何實(shí)現(xiàn)PTM精準(zhǔn)表征？檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

翻譯后修飾（Post-Translational Modifications, PTMs）廣泛參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),、dànbáizhì穩(wěn)定性,、亞細(xì)胞定位等關(guān)鍵生命過程，是系統(tǒng)生物學(xué)與疾病機(jī)制研究的核心關(guān)注點(diǎn),。然而,，多種修飾的共存、空間結(jié)構(gòu)耦合和低豐度特性使其表征異常復(fù)雜。多數(shù)dànbáizhì組學(xué)策略基于酶解肽段分析,，雖在通量和覆蓋度方面具備優(yōu)勢(shì),，卻常因修飾丟失或位點(diǎn)模糊影響定性與定量精度，難以全面解析dànbáizhì異構(gòu)體狀態(tài)（proteoforms）,。Top-Down質(zhì)譜（Top-Down Mass Spectrometry, TD-MS）作為直接分析整蛋白的方法,，在原位保留修飾信息、實(shí)現(xiàn)jīngquè定點(diǎn)識(shí)別方面展現(xiàn)出明顯優(yōu)勢(shì),，已成為dànbáizhì修飾研究中的關(guān)鍵技術(shù)選項(xiàng),。

一、Top-Down質(zhì)譜的三大機(jī)制優(yōu)勢(shì)

1,、保留修飾上下文,，構(gòu)建完整修飾圖譜

Top-Down質(zhì)譜直接對(duì)完整蛋白進(jìn)行電噴霧離子化（ESI）與高分辨檢測(cè)，可在無需酶解的前提下獲取蛋白修飾全貌,，尤其適用于構(gòu)建修飾共存模式及蛋白功能異構(gòu)體的全景圖譜,。對(duì)于研究不同修飾協(xié)同調(diào)控生物功能、構(gòu)建單蛋白多態(tài)性網(wǎng)絡(luò)尤為關(guān)鍵,。

2,、高精度位點(diǎn)定位，適配復(fù)雜修飾解析

通過引入ETD（電子轉(zhuǎn)移解離）,、ECD（電子俘獲解離）等碎裂方式,，Top-Down質(zhì)譜可在zuì大限度保留修飾基團(tuán)的同時(shí)，實(shí)現(xiàn)序列層面裂解,。這種“保修飾解構(gòu)”機(jī)制有效提升了修飾位點(diǎn)的識(shí)別準(zhǔn)確性,，特別適合研究磷酸化、乙?；?、泛素化等動(dòng)態(tài)可逆修飾。

3,、區(qū)分微小差異,，識(shí)別功能異構(gòu)體

Top-Down質(zhì)譜具備優(yōu)異的質(zhì)量分辨率與譜圖解卷能力，能jīngquè區(qū)分僅在修飾類型或位置上存在差異的蛋白異構(gòu)體,。對(duì)于表征疾病相關(guān)蛋白修飾亞型,、解析微環(huán)境調(diào)控機(jī)制等具有重要價(jià)值。

二,、應(yīng)用Top-Down質(zhì)譜進(jìn)行PTM分析的關(guān)鍵要素

盡管Top-Down策略在信息完整性與精度上具備優(yōu)勢(shì),，但其對(duì)實(shí)驗(yàn)操作與數(shù)據(jù)解析提出更高要求：

1、高純度蛋白制備

Top-Down質(zhì)譜對(duì)樣本完整性和純度要求jígāo,。需采用非變性條件進(jìn)行蛋白提取,，并結(jié)合SEC,、CZE或高分辨液相實(shí)現(xiàn)預(yù)分離，避免背景干擾及信號(hào)淹沒,。

2,、平臺(tái)性能與裂解模式選擇

高分辨率質(zhì)譜平臺(tái)是解析復(fù)雜修飾模式的基礎(chǔ)。結(jié)合ETD/ECD等溫和裂解模式不僅有助于保留修飾信息,，也利于實(shí)現(xiàn)更均勻的片段離子覆蓋,。

3、gāojí譜圖解析算法

整蛋白裂解后產(chǎn)生的譜圖通常包含大量重疊信號(hào),，需借助*的解卷積算法與序列匹配引擎進(jìn)行識(shí)別與注釋,，尤其在處理低豐度修飾或共存異構(gòu)體時(shí)，算法性能直接影響分析深度與準(zhǔn)確度,。

三,、Top-Down質(zhì)譜在PTM研究中的應(yīng)用前景

Top-Down質(zhì)譜正推動(dòng)dànbáizhì組學(xué)向更高層級(jí)的結(jié)構(gòu)表征與功能解釋演進(jìn)。其在下列研究場(chǎng)景中展現(xiàn)出廣闊前景：

• 功能蛋白異構(gòu)體構(gòu)建：揭示同源蛋白因修飾差異形成的功能狀態(tài)變體,；

• 疾病標(biāo)志物篩選：識(shí)別修飾異構(gòu)體在癌癥,、神經(jīng)疾病等狀態(tài)中的特異表達(dá)；

• 藥物作用機(jī)制解析：追蹤藥物誘導(dǎo)的修飾變化對(duì)信號(hào)通路的調(diào)控效應(yīng),；

• 單細(xì)胞/低量樣本分析：借助高靈敏Top-Down策略解析微量樣本的修飾結(jié)構(gòu),。

Top-Down質(zhì)譜提供了一種更具結(jié)構(gòu)完整性與修飾保真度的dànbáizhì分析方式，為PTM表征帶來技術(shù)飛躍,。通過該策略,，科研人員得以在單蛋白層面實(shí)現(xiàn)jīngquè、系統(tǒng)的修飾圖譜構(gòu)建,，推動(dòng)從序列到功能的整合性認(rèn)知,。百泰派克生物科技提供從整蛋白制備、修飾結(jié)構(gòu)鑒定到功能關(guān)聯(lián)建模的全流程服務(wù),。我們致力于幫助客戶解析關(guān)鍵修飾事件,，挖掘dànbáizhì功能調(diào)控的分子基礎(chǔ)。無論您的研究聚焦于信號(hào)通路重編程,、疾病蛋白修飾網(wǎng)絡(luò),，或是功能dànbáizhì組構(gòu)建，百泰派克生物科技均可提供穩(wěn)定可靠的數(shù)據(jù)支持與zhuānyè技術(shù)方案,。如需獲取Top-Down質(zhì)譜應(yīng)用建議或定制化實(shí)驗(yàn)方案,，歡迎聯(lián)系我們！

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一,、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析,，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù),，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析,，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù),。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì,，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析,。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上*的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液,、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉,，PEC和和糖基化等N端修飾的影響,。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC,，提供定量dànbáizhì組學(xué),、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué),、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù),。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù),，助力微量樣本蛋白組學(xué),、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析,，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法,，適用于分析組織、細(xì)胞,、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高,，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析,，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確,。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析,，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子,，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜,，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量,。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)*，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù),，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題,。可在單細(xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征,，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白,。

2.分析數(shù)量大,，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右,，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞,，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq,。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化,，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景,；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向,。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾,；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率,、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量,、DNA合成速率以及蛋白酶活性等,。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的,、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案,。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析,，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量,。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥,、免疫疾病及傳染病的解決方案,，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五,、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù),，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù),，提供一系列完善的生物藥物分析方案,，從dànbáizhì、多肽,、抗體,、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析,。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù),，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征,，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù),。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA,、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則,，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證,，建立了完備的質(zhì)量體系,，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份,，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤,，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù),，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行,。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系,，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù)；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可,，為客戶提供符合*藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù),；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué),、代謝組學(xué),、生物藥物表征、單細(xì)胞分析,、單細(xì)胞質(zhì)譜流式,、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái),，滿足您一站式服務(wù)需求,；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇,；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

Top-Down質(zhì)譜如何實(shí)現(xiàn)PTM精準(zhǔn)表征,？檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹