Top-Down蛋白質(zhì)測序：優(yōu)勢、應(yīng)用與挑戰(zhàn)檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

在dànbáizhì組學(xué)不斷向精細(xì)化與功能化拓展的當(dāng)下,，如何從整體層面解析dànbáizhì的結(jié)構(gòu)與修飾,，成為解析生物功能和疾病機制的關(guān)鍵。Top-Downdànbáizhì測序作為直接分析完整dànbáizhì分子的技術(shù)路徑,，近年來在多種復(fù)雜生物體系中展現(xiàn)出dútè優(yōu)勢,，是研究dànbáizhì異構(gòu)體和翻譯后修飾（PTMs）bùkěhuòquē的工具之一。

一,、Top-Downdànbáizhì測序技術(shù)概述

Top-Down方法以完整dànbáizhì為起點,，跳過酶解步驟，直接通過高分辨質(zhì)譜完成離子化,、分離和碎裂,，從而獲取序列信息與修飾狀態(tài)。這種策略可實現(xiàn)對dànbáizhì原始結(jié)構(gòu)的全面保留,，為解析復(fù)雜同種型（Proteoform）和識別共存修飾提供了必要手段,。與基于肽段級別的測序方式相比，Top-Down避免了修飾信息丟失,、位點重定位和同種型混淆等問題,，更適用于jīngquè結(jié)構(gòu)解析與功能研究。

二,、Top-Downdànbáizhì測序技術(shù)優(yōu)勢解析

1,、jīngquè識別同種型異構(gòu)體

一個基因可編碼多個同種型蛋白，其差異可能來自替代剪接,、起始位點變異或多種修飾的組合,。Top-Down通過直接測序完整蛋白體，實現(xiàn)對異構(gòu)體的高分辨識別與定量,，為疾病相關(guān)變異體的發(fā)現(xiàn)提供更高靈敏度的技術(shù)路徑,。

2,、翻譯后修飾的完整解析

在肽段級別分析中，翻譯后修飾（如磷酸化,、乙?；⒓谆┮滓蛎盖袛嗔盐稽c偏好性而發(fā)生偏差,，造成修飾位置的不確定性,。Top-Down可在不破壞修飾組合結(jié)構(gòu)的前提下，完整記錄并定位多重修飾,，尤其適用于信號通路中動態(tài)修飾的追蹤,。

3、高結(jié)構(gòu)保真度支持空間構(gòu)象研究

Top-Down質(zhì)譜可獲得更豐富的片段離子,，支持推斷dànbáizhì的二級和三維結(jié)構(gòu)特征,。對于需要解析構(gòu)象變化或受限空間修飾的研究場景，具備yōuyuè的信息覆蓋能力,。

4,、一站式定性定量能力

Top-Down技術(shù)不僅可提供dànbáizhì序列與修飾信息，還能在同一實驗中實現(xiàn)定量分析,，尤其適用于對單一目標(biāo)蛋白在不同狀態(tài)下的表達(dá)與修飾比較,。

三、Top-Downdànbáizhì測序主要應(yīng)用場景

1,、疾病機制研究與生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)

在腫瘤,、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、自身免疫等復(fù)雜病理狀態(tài)中,，dànbáizhì異構(gòu)體的表達(dá)變化往往早于轉(zhuǎn)錄組水平的改變,。Top-Down能夠識別疾病相關(guān)的特異性Proteoform，為生物標(biāo)志物篩選與jīngzhǔn治療靶點的確立提供數(shù)據(jù)支持,。

2,、細(xì)胞應(yīng)答與修飾動態(tài)調(diào)控分析

細(xì)胞對刺激或藥物的應(yīng)答常通過PTMs調(diào)控蛋白活性。Top-Down在不丟失共存修飾組合的前提下,，捕捉細(xì)胞狀態(tài)轉(zhuǎn)變中的修飾圖譜變化,，揭示調(diào)控機制。

3,、生物制品結(jié)構(gòu)驗證與質(zhì)量控制

對于單克隆抗體,、融合蛋白等復(fù)雜生物制劑，結(jié)構(gòu)完整性直接影響其活性與穩(wěn)定性,。Top-Down能識別剪切體,、去糖化、脫?；任⑿∽儺?，滿足結(jié)構(gòu)一致性審評標(biāo)準(zhǔn),，已逐步應(yīng)用于生物藥開發(fā)與質(zhì)量評估環(huán)節(jié)。

四,、Top-Downdànbáizhì測序技術(shù)挑戰(zhàn)

1、高分辨儀器要求

完整dànbáizhì分析對質(zhì)譜分辨率和碎裂效率提出jígāo要求,，目前僅部分平臺具備覆蓋高質(zhì)量碎片信息的能力,，尚未形成普及化配置。

2,、樣品預(yù)處理復(fù)雜度

完整dànbáizhì在富集與分離過程中易發(fā)生降解與聚集,，分析前需優(yōu)化緩沖體系、去鹽策略與分離流程,，對實驗設(shè)計提出更高門檻,。

3、數(shù)據(jù)處理算法尚不成熟

Top-Down產(chǎn)生的碎片離子信息龐大且復(fù)雜,，對數(shù)據(jù)庫搜索,、修飾位點匹配及異構(gòu)體鑒定算法的依賴程度遠(yuǎn)高于其他方法。數(shù)據(jù)分析工具仍需持續(xù)迭代,，才能支撐高通量研究需求,。

隨著質(zhì)譜硬件不斷進(jìn)化（如ETD/ECD碎裂技術(shù)提升）、自動化樣品制備平臺落地,，以及AI驅(qū)動的數(shù)據(jù)解析方法不斷優(yōu)化,，Top-Downdànbáizhì測序的通量與穩(wěn)定性正在快速提升。該技術(shù)有望在dànbáizhì功能組學(xué),、疾病機制解析和生物制品開發(fā)中發(fā)揮更廣泛作用,，并與其他組學(xué)手段形成互補協(xié)同，構(gòu)建多維度生物信息解析體系,。百泰派克生物科技聚焦前沿dànbáizhì組學(xué)技術(shù),，基于*的質(zhì)譜平臺，搭建了適用于Top-Down分析的一體化流程,。我們提供包括完整蛋白提取,、前處理優(yōu)化、分離富集,、質(zhì)譜測定及數(shù)據(jù)注釋在內(nèi)的定制化服務(wù),，適用于蛋白異構(gòu)體研究與修飾圖譜繪制。

百泰派克生物科技特色項目

一,、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進(jìn)行分析,，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù)，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,，Nduāncèxù,，Cduāncèxù和全序列分析,，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對于未知理論序列的dànbáizhì,，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù),，對蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.采用目前世界上*的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達(dá) 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液,、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響,。

二,、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué),、靶向dànbáizhì組學(xué),、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù),。此外,，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué),、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作,。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法,，適用于分析組織,、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高,，實驗結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測較低豐度蛋白,，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確,。

三,、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子,，然后用流式細(xì)胞原理分離單個細(xì)胞,，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號分子表達(dá)量,。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.技術(shù)*,，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題,?？稍趩渭?xì)胞層面上對多種指標(biāo)同時進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標(biāo)蛋白,。

2.分析數(shù)量大,，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制,，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞,，實現(xiàn)了數(shù)量級的提高,，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化,，在臨床診斷,、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會有新應(yīng)用方向,。除常規(guī)蛋白外,，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾,；

③可檢測細(xì)胞存活率,、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量,、DNA合成速率以及蛋白酶活性等,。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的,、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案,。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析,，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識別和定量,。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥,、免疫疾病及傳染病的解決方案,，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五,、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù),，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù),，提供一系列完善的生物藥物分析方案,，從dànbáizhì、多肽,、抗體,、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析,。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù),，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征,，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務(wù),。公司實驗室遵循NMPA、ICH,、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則,，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系,，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份,，設(shè)備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤,，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù),，支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行,。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系,，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù)；

2.獲國家CNAS實驗室認(rèn)可,，為客戶提供符合*藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù),；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué),、代謝組學(xué),、生物藥物表征、單細(xì)胞分析,、單細(xì)胞質(zhì)譜流式,、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺,，滿足您一站式服務(wù)需求,；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇,；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

Top-Down蛋白質(zhì)測序：優(yōu)勢,、應(yīng)用與挑戰(zhàn)檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹