PRM技術(shù)如何幫助分析低豐度蛋白質(zhì)？檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

dànbáizhì組學(xué)研究與臨床轉(zhuǎn)化應(yīng)用中,，低豐度dànbáizhì的定量檢測始終是技術(shù)瓶頸,。這類蛋白雖然表達水平極低，卻往往具有jígāo的生物學(xué)意義,，例如炎癥因子,、細胞因子、轉(zhuǎn)錄因子或疾病早期標志物,。DDA（Data Dependent Acquisition）模式受限于采集深度和動態(tài)范圍,，難以穩(wěn)定檢測這些低豐度靶標。（Parallel Reaction Monitoring）PRM技術(shù)憑借其高選擇性與靈敏度,，為低豐度蛋白的定量分析提供了有效解決方案,。本文將深入解析PRM技術(shù)在低豐度蛋白檢測中的核心優(yōu)勢、實現(xiàn)機制及百泰派克生物科技的技術(shù)平臺能力。

一,、低豐度dànbáizhì分析的挑戰(zhàn)

1,、動態(tài)范圍極廣：血漿中蛋白濃度可跨越12個數(shù)量級，低豐度蛋白信號極易被高豐度成分掩蓋,。

2,、信噪比低：目標蛋白信號微弱，在復(fù)雜基質(zhì)背景下易被干擾離子淹沒,。

3,、重復(fù)性差：其他蛋白組學(xué)方法在檢測限附近的定量穩(wěn)定性差，導(dǎo)致跨樣本比較誤差大,。

4,、缺乏穩(wěn)定內(nèi)標：低豐度靶標缺乏可靠的參考點，易受儀器波動或前處理差異影響,。

二,、PRM技術(shù)如何應(yīng)對這些挑戰(zhàn)？

PRM是在高分辨率質(zhì)譜平臺（如Orbitrap）上運行的靶向質(zhì)譜技術(shù),，其特點在于：對特定母離子進行選擇性碎裂,，隨后對其所有碎片離子進行全掃描采集，從而在多個維度上提升低豐度dànbáizhì的檢測能力,。

核心優(yōu)勢如下：

1,、高分辨率消除背景干擾

（1）PRM技術(shù)常用的Orbitrap質(zhì)譜儀可提供>30,000的分辨率，有效區(qū)分質(zhì)荷比相近的干擾離子,。

（2）jīngquè質(zhì)量篩選窗口（±5 ppm）大幅提高信噪比,，增強低豐度信號的識別能力。

2,、多碎片離子增強定量特異性

（1）相比SRM只能采集1~2個transition,，PRM可同時記錄全部碎片離子，后期選擇zuì優(yōu)組合用于定量,。

（2）多維確認機制顯著提升低豐度信號的可信度,。

3、自由選擇定量離子,，提高重現(xiàn)性

研究者可根據(jù)每次運行數(shù)據(jù),，自由選擇zuì佳離子對進行定量，緩解信號不穩(wěn)問題,。

4、結(jié)合穩(wěn)定同位素內(nèi)標實現(xiàn)jīngzhǔn校準

合成的SIL肽段在質(zhì)譜行為與靶標肽段wánquán一致,，可有效補償進樣波動與離子化效率差異,。

三、影響PRM技術(shù)檢測低豐度蛋白效果的關(guān)鍵因素

1、肽段選擇質(zhì)量

（1）優(yōu)選具有良好離子響應(yīng),、wúxiū飾,、無二義性的特征肽段。

（2）可結(jié)合DIA數(shù)據(jù),、數(shù)據(jù)庫預(yù)測工具輔助篩選（如PeptideAtlas,、Prosit）。

2,、樣本預(yù)處理與富集技術(shù)

采用蛋白脫鹽,、SPE固相萃取、免疫富集（如SISCAPA）等方法去除高豐度背景,，提升目標信號占比,。

3、色譜分離性能優(yōu)化

（1）提高保留時間穩(wěn)定性,，防止目標信號在復(fù)雜洗脫過程中被掩蓋,。

（2）可使用多維色譜或延長梯度增強分離度。

4,、質(zhì)譜采集參數(shù)調(diào)節(jié)

調(diào)整孤立窗口大小,、注入時間（IT）與自動增益控制（AGC）設(shè)置，確保低豐度離子充分采集,。

四,、百泰派克生物科技的PRM技術(shù)平臺

百泰派克生物科技在低豐度dànbáizhì靶向定量領(lǐng)域積累了豐富的技術(shù)經(jīng)驗，構(gòu)建了以下優(yōu)勢體系：

1,、設(shè)備平臺*：采用Orbitrap Exploris 480等高分辨儀器,，提供高靈敏度、高通量的PRM分析能力,。

2,、方法學(xué)定制開發(fā)：根據(jù)客戶靶標特性，個性化設(shè)計肽段,、優(yōu)化參數(shù),、定制SIL內(nèi)標。

3,、全流程標準化質(zhì)控：從樣本處理,、肽段合成、數(shù)據(jù)分析到項目報告,，均設(shè)有嚴格質(zhì)量控制節(jié)點,。

4、復(fù)雜樣本適配能力：針對血漿,、腦脊液,、細胞裂解液等高背景樣本，提供富集和前處理解決方案。

PRM技術(shù)憑借其高選擇性,、高靈敏度和高度定量一致性,，正逐步成為低豐度dànbáizhì分析的主流手段。面對疾病標志物驗證,、藥物靶點研究等場景,，PRM為科研人員提供了強有力的數(shù)據(jù)支持。百泰派克生物科技將持續(xù)優(yōu)化PRM平臺能力,，為客戶提供更jīngzhǔn,、更可靠的低豐度蛋白定量服務(wù)。

百泰派克生物科技特色項目

一,、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進行分析,，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù)，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,，Nduāncèxù,，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù),。對于未知理論序列的dànbáizhì,，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù)，對蛋白序列進行分析,。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.采用目前世界上*的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液,、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉,，PEC和和糖基化等N端修飾的影響,。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC,，提供定量dànbáizhì組學(xué),、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué),、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù),。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù),，助力微量樣本蛋白組學(xué),、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析,，發(fā)現(xiàn)新的生物標記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標記方法,，適用于分析組織、細胞,、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高,，實驗結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測較低豐度蛋白,，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準確,。

三、單細胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進行單細胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析,，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內(nèi)部的分子,，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質(zhì)量譜,，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細胞表面和內(nèi)部的信號分子表達量,。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.技術(shù)*，*技術(shù)空白

采用金屬標記抗體技術(shù),，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題,。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征,，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白,。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制,，所有樣本細胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右,，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現(xiàn)了數(shù)量級的提高,，且成本不高于單細胞RNAseq,。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷,、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景,；

②將金屬標簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外,，質(zhì)譜流式細胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾,；

③可檢測細胞存活率、細胞大小,、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達量,、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四,、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的,、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別,。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺進行免疫肽組學(xué)分析,，可從zuì小的樣品材料中進行可重復(fù)的識別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究,，旨在助力科研工作者尋找癌癥,、免疫疾病及傳染病的解決方案,，深入挖掘未知的靶標。

五,、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù),，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù),，提供一系列完善的生物藥物分析方案,，從dànbáizhì、多肽,、抗體,、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析,。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù),，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征,，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務(wù)。公司實驗室遵循NMPA,、ICH,、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認證,，建立了完備的質(zhì)量體系,，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計量/期間核查,，軟件審計追蹤,，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā),、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行,。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù),；

2.獲國家CNAS實驗室認可,，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué),、多肽組學(xué),、代謝組學(xué)、生物藥物表征,、單細胞分析,、單細胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等,；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺,，滿足您一站式服務(wù)需求,；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇,；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

PRM技術(shù)如何幫助分析低豐度蛋白質(zhì),？檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹