PRM技術如何幫助分析低豐度蛋白質？檢測技術服務詳情介紹

dànbáizhì組學研究與臨床轉化應用中,，低豐度dànbáizhì的定量檢測始終是技術瓶頸,。這類蛋白雖然表達水平極低，卻往往具有jígāo的生物學意義,，例如炎癥因子,、細胞因子、轉錄因子或疾病早期標志物,。DDA（Data Dependent Acquisition）模式受限于采集深度和動態(tài)范圍,，難以穩(wěn)定檢測這些低豐度靶標。（Parallel Reaction Monitoring）PRM技術憑借其高選擇性與靈敏度,，為低豐度蛋白的定量分析提供了有效解決方案,。本文將深入解析PRM技術在低豐度蛋白檢測中的核心優(yōu)勢、實現(xiàn)機制及百泰派克生物科技的技術平臺能力,。

一,、低豐度dànbáizhì分析的挑戰(zhàn)

1、動態(tài)范圍極廣：血漿中蛋白濃度可跨越12個數(shù)量級,，低豐度蛋白信號極易被高豐度成分掩蓋,。

2、信噪比低：目標蛋白信號微弱,，在復雜基質背景下易被干擾離子淹沒,。

3,、重復性差：其他蛋白組學方法在檢測限附近的定量穩(wěn)定性差，導致跨樣本比較誤差大,。

4,、缺乏穩(wěn)定內標：低豐度靶標缺乏可靠的參考點，易受儀器波動或前處理差異影響,。

二,、PRM技術如何應對這些挑戰(zhàn)？

PRM是在高分辨率質譜平臺（如Orbitrap）上運行的靶向質譜技術,，其特點在于：對特定母離子進行選擇性碎裂,，隨后對其所有碎片離子進行全掃描采集，從而在多個維度上提升低豐度dànbáizhì的檢測能力,。

核心優(yōu)勢如下：

1、高分辨率消除背景干擾

（1）PRM技術常用的Orbitrap質譜儀可提供>30,000的分辨率,，有效區(qū)分質荷比相近的干擾離子,。

（2）jīngquè質量篩選窗口（±5 ppm）大幅提高信噪比，增強低豐度信號的識別能力,。

2,、多碎片離子增強定量特異性

（1）相比SRM只能采集1~2個transition，PRM可同時記錄全部碎片離子,，后期選擇zuì優(yōu)組合用于定量,。

（2）多維確認機制顯著提升低豐度信號的可信度。

3,、自由選擇定量離子,，提高重現(xiàn)性

研究者可根據每次運行數(shù)據，自由選擇zuì佳離子對進行定量,，緩解信號不穩(wěn)問題,。

4、結合穩(wěn)定同位素內標實現(xiàn)jīngzhǔn校準

合成的SIL肽段在質譜行為與靶標肽段wánquán一致,，可有效補償進樣波動與離子化效率差異,。

三、影響PRM技術檢測低豐度蛋白效果的關鍵因素

1,、肽段選擇質量

（1）優(yōu)選具有良好離子響應,、wúxiū飾、無二義性的特征肽段,。

（2）可結合DIA數(shù)據,、數(shù)據庫預測工具輔助篩選（如PeptideAtlas、Prosit）,。

2,、樣本預處理與富集技術

采用蛋白脫鹽,、SPE固相萃取、免疫富集（如SISCAPA）等方法去除高豐度背景,，提升目標信號占比,。

3、色譜分離性能優(yōu)化

（1）提高保留時間穩(wěn)定性,，防止目標信號在復雜洗脫過程中被掩蓋,。

（2）可使用多維色譜或延長梯度增強分離度。

4,、質譜采集參數(shù)調節(jié)

調整孤立窗口大小,、注入時間（IT）與自動增益控制（AGC）設置，確保低豐度離子充分采集,。

四,、百泰派克生物科技的PRM技術平臺

百泰派克生物科技在低豐度dànbáizhì靶向定量領域積累了豐富的技術經驗，構建了以下優(yōu)勢體系：

1,、設備平臺*：采用Orbitrap Exploris 480等高分辨儀器,，提供高靈敏度、高通量的PRM分析能力,。

2,、方法學定制開發(fā)：根據客戶靶標特性，個性化設計肽段,、優(yōu)化參數(shù),、定制SIL內標。

3,、全流程標準化質控：從樣本處理,、肽段合成、數(shù)據分析到項目報告,，均設有嚴格質量控制節(jié)點,。

4、復雜樣本適配能力：針對血漿,、腦脊液,、細胞裂解液等高背景樣本，提供富集和前處理解決方案,。

PRM技術憑借其高選擇性,、高靈敏度和高度定量一致性，正逐步成為低豐度dànbáizhì分析的主流手段,。面對疾病標志物驗證,、藥物靶點研究等場景，PRM為科研人員提供了強有力的數(shù)據支持,。百泰派克生物科技將持續(xù)優(yōu)化PRM平臺能力,，為客戶提供更jīngzhǔn,、更可靠的低豐度蛋白定量服務。

百泰派克生物科技特色項目

一,、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進行分析,，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,，Nduāncèxù,，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務,。對于未知理論序列的dànbáizhì,，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析,。

※服務優(yōu)勢：

1.采用目前世界上*的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液,、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉,，PEC和和糖基化等N端修飾的影響,。

二、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,，提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學,、多肽組學,、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外,，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務,，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作,。

※服務優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析,，發(fā)現(xiàn)新的生物標記物;

2.體內體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織,、細胞,、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白,，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析,，分析更系統(tǒng)準確。

三,、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統(tǒng)進行單細胞質譜流式技術分析,，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞,，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜,，zuì后將原子質量譜數(shù)據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量,。

※服務優(yōu)勢：

1.技術*，*技術空白

采用金屬標記抗體技術,，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題,。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征,，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白,。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制,，所有樣本細胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右,，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現(xiàn)了數(shù)量級的提高,，且成本不高于單細胞RNAseq,。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷,、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景,；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規(guī)蛋白外,，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾,；

③可檢測細胞存活率、細胞大小,、mRNA轉錄子表達量,、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四,、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的,、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別,。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析,，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規(guī)模的研究,，旨在助力科研工作者尋找癌癥,、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標,。

五,、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF,，高效色譜分離技術,，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽,、抗體,、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產品變異性和純度分析,。旨在提供優(yōu)質生物藥物分析服務,，幫助生物醫(yī)藥生產商提高生物藥物品質。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征,，生物質譜多組學優(yōu)質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA,、ICH,、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證,，建立了完備的質量體系,，數(shù)據冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查,，軟件審計追蹤,，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發(fā),、藥物申報注冊和生產放行,。

1.公司采用ISO9001質量控制體系，zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務,；

2.獲國家CNAS實驗室認可,，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質量研究服務；

3.業(yè)務范圍覆蓋dànbáizhì組學,、多肽組學,、代謝組學,、生物藥物表征,、單細胞分析、單細胞質譜流式,、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等,；

4.七大質量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求,；

5.服務3000+企業(yè),，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質的生物質譜分析服務!

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