JM110 感受態(tài)細(xì)胞說明書

（Rev.A）

保 存：-80℃保存,，運輸為干冰包裝。自收貨之日起液氮保存至少一年,，-80℃保存至少 6 個月,。

產(chǎn)品簡介：

本公司生產(chǎn)的JM110感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌JM110菌株經(jīng)特殊工藝制備得到，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化,。使用pUC19 質(zhì)粒檢測,，轉(zhuǎn)化效率zui高可達 2×10⁷cfu/μg，-80℃保存 3-5 個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變,。

基因型:recAsupE44endA1 hsdR17 gyrA96relA1 thi Δ(lac-proAB) F’[traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15]

特 點: 一種琥珀抑制型 F’重組缺陷菌株,。支持 M13 噬菌體載體的生長，對轉(zhuǎn)染的 DNA 有修飾作用,，但 無限制作用,。該菌株中的 F’帶有 lacZΔM15，后者使得與在 λZAP 中編碼的 β-半乳糖 苷酶氨基端進行 α-互補,， 可用于藍(lán)白斑篩選,。

操作方法：（以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進行）

1. 將感受態(tài)細(xì)胞置于冰上融化,，以下實驗以 100μl 感受態(tài)細(xì)胞為例。
2. 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入需轉(zhuǎn)化的目的 DNA,，注意目的 DNA 的體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一,，輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，冰浴放置 30 分鐘,。
3. 將離心管置于 42℃水浴中熱擊60-90秒,，然后快速轉(zhuǎn)移到冰浴中放置 2-3 分鐘，注意不要搖動離心管,。
4. 向離心管中加入 900μl 無菌無抗的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基,，37℃ 180 rpm 振蕩培養(yǎng) 30分鐘到1小時,。目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達,，使菌體復(fù)蘇。
5. 取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞涂布含相應(yīng)抗生素的 SOC 或 LB 平板,，37℃倒置培養(yǎng) 12-16小時或6-8小時培養(yǎng),。涂布用量可根據(jù)具體實驗來調(diào)整，如轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較多,，可取200μl 左右的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板,；反之，如轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較少,，可4℃,，2500 g離心5min后，棄去上清約700 μl,，用剩余約200-300 μl 的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板,。過多菌液可以抑制細(xì)菌生長。

注意事項：

1. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-80℃,，不可反復(fù)凍融,，否則其轉(zhuǎn)化效率將會降低。
2. 實驗過程中應(yīng)嚴(yán)格無菌操作,，防止其它 DNA 或雜菌的污染,，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響,。
3. 轉(zhuǎn)化時,，轉(zhuǎn)化效率與外源 DNA 的濃度在一定范圍內(nèi)成正比，但當(dāng)加入的外源 DNA 量過多或體積過大反而會降低轉(zhuǎn)化效率,。轉(zhuǎn)化時 DNA 體積要小于感受態(tài)細(xì)胞體積的十分之一,。
4. 轉(zhuǎn)化率的計算：轉(zhuǎn)化率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板 DNA 總量。
5. 為防止轉(zhuǎn)化實驗不成功,，可以保留部分連接產(chǎn)物,，以重新轉(zhuǎn)化,，將損失降到zui低。

感謝您對我們公司的支持與信任,！

使用我公司產(chǎn)品時,，如有任何實驗相關(guān)的問題，請致郵：cs_bioswamp,。我們會*時間協(xié)助解決,，謝謝！