E+ DH5α 感受態(tài)細胞說明書

（Rev.A）

保 存：-80℃保存，運輸為干冰包裝,。自收貨之日起液氮保存至少一年,，-80℃保存至少 6 個月。

產(chǎn)品簡介：

本公司生產(chǎn)的E⁺ DH5α感受態(tài)細胞是采用大腸桿菌DH5α菌株經(jīng)特殊工藝制備得到,，具有無需繁瑣的冰浴,、熱擊程序，簡單快速的進行質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化,。使用pUC19 質(zhì)粒檢測,，轉(zhuǎn)化效率zui高可達 2×10⁷cfu/μg，-80℃保存 3-5 個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變,。

基因型:   supE44△lacU169（φ80 lacZ△M15）hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1

特 點: 一種用于鋪制與培養(yǎng)質(zhì)粒平板和粘粒平板的重組缺陷的抑制型菌株,。其 φ80 lacZ△M15 基因的產(chǎn)物可與 pUC 載體編碼的 β-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn) β 互補，可用于藍白斑篩選。

操作方法：（以下操作均按無菌條件的標準進行）

1. 將感受態(tài)細胞置于冰上融化,，以下實驗以 100 μl 感受態(tài)細胞為例,。
2. 向感受態(tài)細胞懸液中加入需轉(zhuǎn)化的目的 DNA，注意目的 DNA 的體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一,。
3. 室溫靜置5-10min,。
4. 向離心管中加入 900μl 無菌無抗的 SOC（本試劑盒提供） 或 LB 培養(yǎng)基，37℃ 180 rpm 振蕩培養(yǎng) 30分鐘到1小時,。目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標記基因表達,，使菌體復蘇。
5. 取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細胞涂布含相應抗生素的 SOC 或 LB 平板,，37℃倒置培養(yǎng) 12-16小時或6-8小時培養(yǎng),。涂布用量可根據(jù)具體實驗來調(diào)整，如轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較多,，可取200μl 左右的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板,；反之，如轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較少,，可4℃,，2500g離心5min后，棄去上清約700μl,，用剩余約200-300μl 的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板,。過多菌液可以抑制細菌生長。如果預計的克隆較少,，可通過離心后吸除部分培養(yǎng)液,，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。

注意事項：

1. 感受態(tài)細胞應保存在-80℃,，不可反復凍融,，否則其轉(zhuǎn)化效率將會降低。
2. 實驗過程中應嚴格無菌操作,，防止其它 DNA 或雜菌的污染,，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響,。
3. 轉(zhuǎn)化時,，轉(zhuǎn)化效率與外源 DNA 的濃度在一定范圍內(nèi)成正比，但當加入的外源 DNA 量過多或體積過大反而會降低轉(zhuǎn)化效率,。轉(zhuǎn)化時 DNA 體積要小于感受態(tài)細胞體積的十分之一,。
4. 轉(zhuǎn)化率的計算：轉(zhuǎn)化率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板 DNA 總量,。
5. 為防止轉(zhuǎn)化實驗不成功,，可以保留部分連接產(chǎn)物，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到zui低,。

感謝您對我們公司的支持與信任,！

使用我公司產(chǎn)品時，如有任何實驗相關(guān)的問題,，請致郵：cs_bioswamp,。我們會*時間協(xié)助解決，謝謝,！