手機版
化工儀器網(wǎng)手機版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關(guān)注視頻號
western blot 實驗經(jīng)驗總結(jié)（一）
western blot 實驗經(jīng)驗總結(jié)（一） 問題：zui近做 western blot 實驗，目的蛋白大小是 25 kD,。實驗結(jié)果顯示,，目的條帶處無任何信號，而內(nèi)參條帶清晰,。同樣條件下,，內(nèi)參照效果很好，為何目的條帶卻檢測不到,？且據(jù)文獻報道,，同種樣品中該蛋白是高豐度的。
WB 檢測中蛋白質(zhì)條帶無信號的可能性有：目的蛋白在樣品中沒有表達,；目的蛋白在樣品處理過程中發(fā)生降解,；一抗或二抗質(zhì)量差；抗體濃度不合適,；轉(zhuǎn)膜效果不好,，膠上蛋白沒有轉(zhuǎn)到膜上或者轉(zhuǎn)過了。首先,，用考馬斯亮藍染色轉(zhuǎn)過膜的 SDS-PAGE 膠,，結(jié)果未看見明顯條帶，說明轉(zhuǎn)膜后膠上基本沒有蛋白,。其次,，抗體購自高信譽的試劑公司，暫時不考慮是抗體質(zhì)量問題導(dǎo)致成實驗失敗,。另外文獻已報道該樣品中目標(biāo)蛋白表達較高,，排除不表達的可能性。且處理樣品的過程非常短,，保存得當(dāng),，未檢測到降解條帶，因此排除樣品降解,。
zui后,，膜和轉(zhuǎn)膜條件。內(nèi)參條帶清晰，目標(biāo)條帶分子量較小,，排除沒有轉(zhuǎn)到膜上,。因此zui大可能是蛋白轉(zhuǎn)過了，用小孔徑膜,，縮短轉(zhuǎn)膜時間,。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載,、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品,，目的在于傳遞更多信息,，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任,。其他媒體,、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,，并自負版權(quán)等法律責(zé)任,。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心