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RNA提取原理RNA提取時(shí)，加lv仿后分三層：水相(含rna,可能還有少量DNA）,，中間白色薄層（應(yīng)該是蛋白和DNA）,，下層有機(jī)相（lv仿和蛋白等）lv仿是分子量比較大的有機(jī)溶劑，在提取RNA時(shí),，lv仿可以有效的使有機(jī)相和無機(jī)相迅速分離,。DNA提取過程有機(jī)相中主要是酚和蛋白結(jié)合，從而使得蛋白和DNA脫離,，DNA進(jìn)入水相,。但是在RNA的提取過程就要避免蛋白和DNA脫離，否則DNA會(huì)釋放到水相,。不管有酚也好,，沒有酚也好，lv仿本身也對(duì)蛋白有變性作用,，劇烈的震蕩,，很容易使得DNA的親水基團(tuán)，與水相接觸
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RNA甲基化（RNAmethylation）是一類表觀遺傳修飾，在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的超過100種不同的RNA化學(xué)修飾中,，主要有6-甲基腺嘌呤（N6-methyladenosine,m6A）,、5-甲基胞嘧啶（C5-methylcytidine,m5C）和1-甲基腺嘌呤（N1-methyladenosine,m1A）。RNA甲基化在調(diào)控基因表達(dá),、編輯,、穩(wěn)定性及降解等方面扮演重要角色,。早在20世紀(jì)70年代，人們已經(jīng)在真核生物的mRNA和lncRNA中發(fā)現(xiàn)了m6A修飾,。但受制于技術(shù)的局限性,，無法開展m6A檢測(cè)尤
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慢病毒包裝簡(jiǎn)要程序：以六孔板中的1孔為例,，每個(gè)樣品需要1×10∧6個(gè)293FT細(xì)胞,。1、取1.5ml滅菌EP管,，加入1.5μg包裝混合質(zhì)粒和0.5μg表達(dá)質(zhì)粒以及250μl的無血清OptiMEM,。輕柔混勻，室溫孵育5min,。2,、取1.5ml滅菌EP管，取9μl脂質(zhì)體2000l溶于250μl無血清Opti-MEMI培養(yǎng)基中,。輕柔混勻,，室溫孵育5min。3,、將DNA溶液和脂質(zhì)體溶液輕柔混勻,。室溫孵育20min4、用胰酶消化并記數(shù)293FT細(xì)胞,。用含血清的DMEM培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,。5、在六孔板中每孔,，加
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一,、自噬誘導(dǎo)劑(1)BredeldinA/Thapsigargin/Tunicamycin：模擬內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(2)Carbamazepine/L-690，330/LithiumChloride（氯化鋰）：IMPase抑制劑（即Inositolmonophosphatase,，肌醇單磷酸酶）(3)Earle's平衡鹽溶液：制造饑餓(4)N-Acetyl-D-sphingosine（C2-ceramide）：ClassIPI3KPathway抑制劑(5)Rapamycin：mTOR抑制劑(6)Xesto
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細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染情況總結(jié)如下:常見的污染如下：1,、細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，根據(jù)感染細(xì)菌的不同,，可有不同的外形,，培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯,。仔細(xì)檢查一下器皿的滅菌情況,，是否在高壓滅菌時(shí)放氣時(shí)間足夠，壓力足夠,！尤其是和儲(chǔ)存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品,，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲(chǔ)存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象,！可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理2、霉菌：培養(yǎng)液是清亮的,，倒置顯微鏡下無雜質(zhì),，37度孵箱培養(yǎng)2-3天，仍清亮,，但出現(xiàn)絮狀雜質(zhì),，鏡
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常見菌類污染情況圖片1.桿菌常見的有大腸桿菌，長(zhǎng)度通常在2-5um左右,。2.球菌常見的有葡萄球菌,，直徑通常在1-2um左右。3.霉菌常見的有毛霉,，菌絲寬2-10um左右,，長(zhǎng)度短則幾十um，長(zhǎng)則可達(dá)幾mm,。以上3種是細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見的菌類污染,，其共性是增殖快，適應(yīng)能力強(qiáng),，很難*,，一般如果確認(rèn)培養(yǎng)細(xì)胞有以上污染，建議盡快丟棄,，并檢查相關(guān)試劑和培養(yǎng)箱是否有污染,，確認(rèn)沒有后再重新復(fù)蘇。那么細(xì)胞如果還是不幸污染了,，那又該怎么辦呢,？我把細(xì)胞污染分為早期和晚期兩種。早期污染是細(xì)胞狀態(tài)變差,，但依舊能保持生長(zhǎng),，
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無論新人還是熟手，細(xì)胞污染都是必須要面對(duì)的,，那對(duì)于細(xì)胞污染,，我覺得zui好的措施就是預(yù)防為主，因?yàn)榧?xì)胞一旦污染,，想救是非常困難的,，即便救活，細(xì)胞狀態(tài)也會(huì)差很多,。所以我先來說下我是怎么預(yù)防細(xì)胞污染的,。生物安全柜是處理細(xì)胞的主要場(chǎng)所，也是細(xì)胞發(fā)生污染的主要場(chǎng)所，所以安全柜的正確使用是預(yù)防細(xì)胞污染的di一步,。那么安全柜內(nèi)需要注意的小細(xì)節(jié)有哪些呢,？首先，所有進(jìn)入安全柜的東西在進(jìn)入前都要用75%的酒精消毒,。特別要注意的是我們的手,，只要出了安全柜，再進(jìn)入安全柜前都要噴75%的酒精消毒,。實(shí)驗(yàn)耗材盡量放置在合適
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一,、肉眼觀察以下幾項(xiàng)：1.細(xì)胞瓶身：如果瓶身上沒有裂縫，正常,；如果瓶身上有裂縫,，則污染幾率非常大。2.培養(yǎng)基顏色：如果培養(yǎng)基顏色是紅色或者粉色,，正常,；如果是橙色，則可能是污染或者細(xì)胞過密,；如果是黃色,，則污染幾率非常大。3.培養(yǎng)基澄清度：如果培養(yǎng)基澄清,，正常,；如果有少許漂浮物，則可能是污染或者有細(xì)胞凋亡,；如果培養(yǎng)基很渾濁,，甚至出現(xiàn)絮狀物，則污染幾率非常大,。二,、進(jìn)行顯微鏡下觀察（通常觀察前需先靜置細(xì)胞1-2h）顯微鏡下可以清晰觀察到細(xì)胞是否有菌類污染，菌類污染通常分為桿菌,、球菌和霉菌,，為了方便大家分
