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1 乙醇浸泡

    在室溫下,，將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時(shí),，并不斷攪拌以保證凝膠溶脹,，用無(wú)鹽水洗去殘存的乙醇濾干,。

2 無(wú)鹽水浸泡

    室溫下,，在無(wú)鹽水中充分溶脹24小時(shí),，間隙攪拌,，以保證凝膠的*溶脹,。

3 鹽酸浸泡

    在常溫下再用0.1M HCl浸泡12小時(shí)，間隙攪拌,，濾干,，水洗只中性。

4 裝柱

將溶脹好的凝膠根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi),，注意保持濕態(tài)裝柱,，并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層。

5 平衡

上樣前平衡層析柱至少3-5個(gè)柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止（流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值）,。

6 上樣

凝膠過(guò)濾的上樣量一般為5%的柱床體積,，我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積，視分離情況可以調(diào)整,；脫鹽時(shí)上樣量可以達(dá)到20%的柱床體積,，柱高的選擇也與分離要求相關(guān)，柱高控制在40-50cm以下,，過(guò)高的凝膠層會(huì)引起較大的反壓,，應(yīng)當(dāng)盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制,，脫鹽時(shí)高徑比為5：1即可,。

7 洗脫方法

    可以用無(wú)鹽水，也可以采用上柱時(shí)的緩沖液洗脫,；在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化,。

8 清洗

    每次用完之后，將柱子里的緩沖液置換為去離子水,，然后用20%的乙醇封存。

9 在位清洗（CIP）

     凝膠使用十次后作一次CIP,，目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白,。方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗四個(gè)柱體積，再以至少三個(gè)柱體積平衡緩沖液再生,。