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一、ELISA 實(shí)驗(yàn)中血清的采集,、處理和保存

1,、 真空采血針采集 2 ml 新鮮血液，加入無(wú)菌試管中,。
2,、 采血后室溫靜置 1 小時(shí)。
3,、 將采集血液用離心機(jī) 4℃,，2500rpm 離心 10 min，,，將離心好的勻漿留上清,，棄下面沉淀,。 4、 取上清,。 分裝凍存?zhèn)溆茫?2-8℃ 下，可放置保存 24-48 小時(shí),； -20℃ 下,，可放置保存 1 個(gè)月； -70℃ 下,，可放置保存 6 個(gè)月,。5、 根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要,，取適量上清夜進(jìn)行各種 ELISA 測(cè)定,。 大部分 ELISA 檢測(cè)均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集,，應(yīng)注意避免溶血,，紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì)，以 HRP 為標(biāo)記的 ELISA 測(cè)定中,，溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色,。此外還應(yīng)避免細(xì)菌污染，因?yàn)榫w中可能含有含有內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,，也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng),。血清標(biāo)本宜在新鮮 時(shí)檢測(cè)。如在冰箱中保存過(guò)久,，其中的可發(fā)生聚合,，在間接法 ELISA 中可使本底加深。

二,、ELISA 實(shí)驗(yàn)中血漿的采集,、處理和保存

1、 真空采血針采集 2 ml 新鮮血液,，加入無(wú)菌試管中,。
2、 按 1:9 加入抗凝劑（EDTA,、草酸鈉,、肝素、枸櫞酸鈉）,，30 分鐘內(nèi)于冰上分離血漿以 減少血小板的污染,；（也可以直接用抗凝管采集）。
3,、 將采集血液用離心機(jī) 4℃,，2500rpm 離心 5 min,，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉淀,。
4,、 取上清.分裝凍存?zhèn)溆茫?2-8℃ 下，可放置保存 24-48 小時(shí),； -20℃ 下,，可放置保存 1 個(gè)月； -70℃ 下,，可放置保存 6 個(gè)月,。
5、 根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要,，取適量上清夜進(jìn)行各種 ELISA 測(cè)定,。 請(qǐng)注意指標(biāo)說(shuō)明書上對(duì)于抗 凝血?jiǎng)┦欠裼刑厥庖螅ㄗh使用 EDTA,。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,，其他成份均同等于血清。 注意事項(xiàng)：制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑 EDTA, 抗凝不*的標(biāo)本因纖維蛋白原干擾而造成假陽(yáng)性,。

三,、ELISA 實(shí)驗(yàn)中尿液的采集、處理和保存

1,、 采集尿液樣本 500ul,，加入無(wú)菌試管中。
2,、 將采集血液用離心機(jī) 4℃,，2500rpm 離心 10 min，將離心好的樣本留上清,，棄下面沉淀,。

3、取上清,。 分裝凍存?zhèn)溆茫?2-8℃ 下,，可放置保存 24-48 小時(shí)； -20℃ 下,，可放置保存 1 個(gè)月,； -70℃ 下，可放置保存 6 個(gè)月,。

4,、 根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要，取適量上清夜進(jìn)行各種 ELISA 測(cè)定。

四,、ELISA 實(shí)驗(yàn)中腦脊液的采集,、處理和保存

1、采集腦脊液樣本,，加入無(wú)菌試管中
2,、將采集血液用離心機(jī) 4℃，2500rpm 離心 10 min,，,，將離心好的樣本留上清，棄下面沉淀,。 3、取上清,。 分裝凍存?zhèn)溆茫?2-8℃ 下,，可放置保存 24-48 小時(shí)； -20℃ 下,，可放置保存 1 個(gè)月,； -70℃ 下，可放置保存 6 個(gè)月
4,、根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要,，取適量上清夜進(jìn)行各種 ELISA 測(cè)定。

五,、ELISA 實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞上清液的采集,、處理和保存

1、采集細(xì)胞培養(yǎng)上清液 500ul,，加入無(wú)菌試管中,。
2、將采集血液用離心機(jī) 4℃,，2500rpm 離心 10 min,，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉淀,。 3,、取上清。 分裝凍存?zhèn)溆茫?2-8℃ 下,，可放置保存 24-48 小時(shí),； -20℃ 下，可放置保存 1 個(gè)月,； -70℃ 下,，可放置保存 6 個(gè)月。
4、根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要,，取適量上清夜進(jìn)行各種 ELISA 測(cè)定,。

六、ELISA 實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞裂解液的采集,、處理和保存（需要測(cè)蛋白濃度）

1,、 取細(xì)胞培養(yǎng)板或細(xì)胞懸液，用 PBS（PH7.2-7.4）洗滌細(xì)胞培養(yǎng)板 1-2 次,。
2,、 通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑（裂解液），使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。
3,、 將采集血液用離心機(jī) 4℃，2500rpm 離心 20 min,，,，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉 淀,。 4,、取上清。 分裝凍存?zhèn)溆茫?2-8℃ 下,，可放置保存 24-48 小時(shí),； -20℃ 下，可放置保存 1 個(gè)月,； -70℃ 下,，可放置保存 6 個(gè)月5、 根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要,，取適量上清夜進(jìn)行各種 ELISA 測(cè)定,。

七、ELISA 實(shí)驗(yàn)中肺泡灌洗液的采集,、處理和保存

1,、 10% 水合氯醛溶液，腹腔麻醉,。
2,、 打開腹腔，另取 10 ml 注射器行下腔靜脈采血,，盡可能將血放盡,。
3、 在冰面上對(duì)左肺進(jìn)行肺灌洗,。取 37℃ 生理鹽水 5 ml,，分三次灌洗：2 ml、1.5 ml、1.5 ml 灌洗,?；厥章试?70% 以上。
4,、 將肺泡灌洗液用離心機(jī) 4℃,，1500rpm 離心 10 min。
5,、 取上清,。 分裝凍存?zhèn)溆茫?2-8℃ 下，可放置保存 24-48 小時(shí),； -20℃ 下,，可放置保存 1 個(gè)月； -70℃ 下,，可放置保存 6 個(gè)月,。
6、 根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要,，取適量上清夜進(jìn)行各種 ELISA 測(cè)定。

八,、ELISA 實(shí)驗(yàn)中關(guān)節(jié)滑液的采集,、處理和保存

1、 口腔關(guān)節(jié)：患者取坐位,，常規(guī)消毒后,，作皮下及關(guān)節(jié)后區(qū)局部浸潤(rùn)麻醉。然后囑患者大 張口,，采用裝有 2 ml 生理鹽水的注射器（5 號(hào)針頭）作關(guān)節(jié)上腔 穿刺,，髁后進(jìn)針，針尖方向斜向前,、內(nèi),、上，抵達(dá)關(guān)節(jié)結(jié)節(jié)后斜面后稍后退,，回抽如發(fā)現(xiàn)有淡黃色液體,，即表明已進(jìn)入關(guān)節(jié)上腔，注入 2 ml 生理鹽水,，反復(fù)注入,、 回抽五次。 膝骨關(guān)節(jié)滑液：無(wú)菌穿刺取得關(guān)節(jié)液,。
2,、 將關(guān)節(jié)液用離心機(jī) 4℃，1500rpm 離心 15 min，將離心好的勻漿留上清,，棄下面沉淀
3,、 取上清。 分裝凍存?zhèn)溆茫?2-8℃ 下,，可放置保存 24-48 小時(shí),； -20℃ 下，可放置保存 1 個(gè)月,； -70℃ 下,，可放置保存 6 個(gè)月。
4,、 根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要,，取適量上清夜進(jìn)行各種 ELISA 測(cè)定。

九,、 ELISA 實(shí)驗(yàn)中各類組織勻漿的采集,、處理和保存（需要測(cè)蛋白 濃度）

1、 采集組織,，在冰冷的生理鹽水中漂洗,，除去血液，濾紙拭干,，稱重,，剔除附屬的結(jié)締組 織，稱取組織塊,。
2,、 用移液管量取 0.1M PBS 或者用 0.86％ 冷生理鹽水，勻漿介質(zhì)或生理鹽水的體積總量應(yīng) 該是組織塊重量的 9 倍,，用眼科小剪盡快剪碎組織塊（天然時(shí)操作要在冰水浴中進(jìn)行,，將盛有組織 的小燒杯放入冰水中）。
3,、 勻漿的方式有多種： a) 手工勻漿：將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中,，再將剩余的 1/3 勻漿介質(zhì)或生理鹽水 沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊，一起倒入勻漿管中進(jìn)行勻漿,，左手持勻漿管將下 端插入盛有冰水混合物的器皿中,，右手將搗桿垂直插入套管中，上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨數(shù)十次（6～8 分鐘）,，充分研碎,，使組織勻漿化。 b) 機(jī)器勻漿：用組織搗碎機(jī) 10000～15000r/min 上下研磨制成 10％ 組織勻漿,，也可用 內(nèi)切式組織勻漿機(jī)制備（勻漿時(shí)間 10 秒/次,，間隙 30 秒,，連續(xù) 3～5 次，在冰水中進(jìn)行）,，皮膚,、肌肉組織等可延長(zhǎng)勻漿時(shí)間。
4,、 將制備好的 10％ 勻漿用離心機(jī) 4℃,，3000rpm 離心 15 min，將離心好的勻漿留上清,，棄 下面沉淀,。
5、 取上清,。 分裝凍存?zhèn)溆茫?2-8℃ 下,，可放置保存 24-48 小時(shí)； -20℃ 下,，可放置保存 1 個(gè)月,； -70℃ 下，可放置保存 6 個(gè)月,。
6,、 根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要，取適量上清夜進(jìn)行各種 ELISA 測(cè)定,。