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蛋白酶抑制劑/磷酸酶抑制劑為何清除蛋白中的蛋白酶及磷酸酶,？在平衡狀態(tài)下內(nèi)源性蛋白質(zhì)產(chǎn)生并降解,，因此其細(xì)胞水平是穩(wěn)定的,。當(dāng)在體外從細(xì)胞和組織中提取蛋白質(zhì)時(shí)，與蛋白一起釋放出來的還有許多能夠降解提取物中的蛋白質(zhì)的內(nèi)源酶,，例如磷酸酶和蛋白酶。此時(shí)由于蛋白質(zhì)產(chǎn)生被顯著抑制，降解繼續(xù),，因此這些酶可以快速降解提取物中的蛋白。為了防止蛋白純化過程中目的蛋白不受蛋白酶的破壞,，需要加入蛋白酶抑制劑對其進(jìn)行活性抑制,。另外，細(xì)胞中蛋白的磷酸化和去磷酸化是信號轉(zhuǎn)導(dǎo),、細(xì)胞增殖,、細(xì)胞分化和細(xì)胞凋亡等許多重要的生物學(xué)活動(dòng)的調(diào)
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蛋白免疫印跡技術(shù)大揭秘,！近距離防踩坑~蛋白免疫印跡技術(shù)是分子生物學(xué)中常用的三種印記技術(shù)之一,，具有分析容量大、敏感度高,、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),，是檢測蛋白質(zhì)特性、表達(dá)與分布的一種的方法,，如組織抗原的定性定量檢測,、多肽分子的質(zhì)量測定及病毒的抗體或抗原檢測等。被廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)相互作用,、疾病診斷和藥物研發(fā)等領(lǐng)域,。為助力解決蛋白免疫印跡技術(shù)中出現(xiàn)的問題，提高科研工作者的基礎(chǔ)技能水平,，山東大學(xué)齊魯醫(yī)院（第一臨床學(xué)院）學(xué)生黨總支研究生第九黨支部聯(lián)合翌圣生物,，于9月12日（本周二）舉辦“新學(xué)期，新征程——蛋白免疫印跡
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凝膠過濾層析(GelFiltrationChromatography)也稱為分子篩或體積排阻層析(SizeExclusionChromatography),，是根據(jù)分子大小和形狀的差異進(jìn)行分離的一種簡單可靠的層析技術(shù)。凝膠過濾層析屬于非吸附類層析,。分離原理凝膠過濾填料為三維立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),，由于凝膠網(wǎng)孔大小的限制，大分子將不能進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部（即被凝膠排阻在外）,，僅能在凝膠顆粒間隙移動(dòng),，并隨緩沖液一起從柱底先行洗脫。小分子可以自由進(jìn)入并擴(kuò)散到凝膠顆粒內(nèi)部,，小分子歷經(jīng)的路徑更長,，將較晚從柱上洗脫。由于樣
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干貨│從原理到應(yīng)用,，帶你全方面了解T4 gene 32 protein
T4噬菌體基因32編碼蛋白(T4gene32protein，gp32)是一種單鏈DNA（ssDNA）結(jié)合蛋白,，為T4噬菌體DNA復(fù)制和修復(fù)所必需,。它被廣泛地用于穩(wěn)定和標(biāo)記ssDNA區(qū)域，以便用電子顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)DNA的結(jié)構(gòu),、促進(jìn)限制性內(nèi)切酶的消化反應(yīng),、提高RT-PCR中反轉(zhuǎn)錄的效率、增強(qiáng)T4DNA聚合酶的活性和提高PCR的產(chǎn)量等,。T4gene32protein的結(jié)構(gòu)T4gene32protein由301個(gè)氨基酸組成,，大小為34kDa，包含三個(gè)不同的結(jié)構(gòu)域：核心結(jié)構(gòu)域,、N端結(jié)構(gòu)域（NTD）和C端 -
干貨│酶切實(shí)驗(yàn)的這些坑,，你肯定遇到過,！
分子克隆作為分子生物學(xué)的一項(xiàng)成熟技術(shù)，幾乎每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都或多或少的會涉及,。在分子克隆實(shí)驗(yàn)中,，限制性內(nèi)切酶是克隆產(chǎn)品，但大家也常常因?yàn)橄拗菩詢?nèi)切酶的各種問題而感到煩擾,。比如小翌常被問到的：1.限制性內(nèi)切酶種類這么多,，不知道如何選擇；2.酶切不完或出現(xiàn)亂切,、錯(cuò)切的情況,；3.酶切速度慢，需要1h甚至過夜酶,；4.多酶切還需要選擇多款酶切緩沖液,?！槍Φ?個(gè)問題,，小翌會簡單介紹一下什么是限制性內(nèi)切酶，不同內(nèi)切酶的分類如何,，讓您對限制性內(nèi)切酶有一個(gè)更全面的認(rèn)識,。針對第2~4個(gè)問題，翌圣FuniCut®系列快 -
干貨 | 病毒滴度檢測,，除了空斑試驗(yàn)還有更好的選擇
什么是病毒滴度呢,？就像重組蛋白合成以后需要檢測純度一樣，病毒包裝后的效力如何,，如何定量,，也是必須要檢測的，專業(yè)術(shù)語稱為：病毒滴度的測定,。病毒滴度是指單位體積液體中具有生物活性的病毒顆粒數(shù),，是衡量病毒數(shù)量和毒力的一個(gè)重要指標(biāo)。病毒滴度測定是指確定給定樣品中病毒顆粒的濃度的過程,。它是評估病毒產(chǎn)品,，如疫苗、基因治療載體或診斷試劑的質(zhì)量和效力的一個(gè)重要參數(shù),。病毒滴度檢測方法比較病毒滴度的測定方法有多種,，主要分為物理方法和生物方法兩大類,。物理方法是通過測定病毒顆粒的大小、形態(tài),、數(shù)量,、電荷、光學(xué)性質(zhì)等,，來推 -
CUT&Tag優(yōu)于ChIP-Seq的關(guān)鍵竟是它,？
CUT&Tag優(yōu)于ChIP-Seq的關(guān)鍵竟是它,？前面幾期，小翌介紹過“翌圣轉(zhuǎn)座酶系列產(chǎn)品助力NGS文庫構(gòu)建”（戳鏈接了解詳情）,。本期,，小翌重點(diǎn)聊聊pG-Tn5。什么是pG-Tn5pG-Tn5(pG-Tn5Transposase)是將ProteinG(pG)與經(jīng)過改造的Tn5轉(zhuǎn)座酶進(jìn)行融合,，形成的同時(shí)具備轉(zhuǎn)座酶與ProteinG活性的新型融合酶,。ProteinG能特異性與抗體結(jié)合，從而使得pG-Tn5具備更高的靶向性,。Tn5是一種細(xì)菌轉(zhuǎn)座子,經(jīng)改造的Tn5能夠高效地切割DNA,同時(shí)連接上特定的接頭 -
巨噬細(xì)胞清除操作及文獻(xiàn)實(shí)例分析
01巨噬細(xì)胞清除簡介巨噬細(xì)胞是體內(nèi)每個(gè)器官中都存在的細(xì)胞，存在于表皮,、角膜和沒有血管的關(guān)節(jié)內(nèi)部,，其體內(nèi)生物學(xué)研究的重要方法之一是巨噬細(xì)胞耗竭。清除巨噬細(xì)胞,，可以全面了解巨噬細(xì)胞在病理?xiàng)l件下的功能,。目前，巨噬細(xì)胞清除的主要方法包括構(gòu)建巨噬細(xì)胞缺失動(dòng)物模型和使用藥物（氯膦酸鹽脂質(zhì)體）去除法,，但是,，構(gòu)建巨噬細(xì)胞缺失動(dòng)物模型價(jià)格昂貴，周期長,，因此,，氯膦酸鹽脂質(zhì)體（ClodronateLiposomes）是目前最為成熟、方便,、經(jīng)濟(jì)的一種巨噬細(xì)胞清除工具,，可以有效的清除動(dòng)物體內(nèi)包括肝臟，脾臟,，肺部,，血液等多
