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分子克隆作為分子生物學(xué)的一項(xiàng)成熟技術(shù)，幾乎每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都或多或少的會(huì)涉及,。在分子克隆實(shí)驗(yàn)中,，限制性內(nèi)切酶是克隆產(chǎn)品，但大家也常常因?yàn)橄拗菩詢?nèi)切酶的各種問題而感到煩擾,。
比如小翌常被問到的：
1.限制性內(nèi)切酶種類這么多,，不知道如何選擇；
3.酶切速度慢，需要1 h甚至過夜酶,；
……
針對(duì)第1個(gè)問題,，小翌會(huì)簡單介紹一下什么是限制性內(nèi)切酶,，不同內(nèi)切酶的分類如何，讓您對(duì)限制性內(nèi)切酶有一個(gè)更全面的認(rèn)識(shí),。針對(duì)第2~4個(gè)問題,，翌圣 FuniCut® 系列快速內(nèi)切酶通過菌株改造,，配合優(yōu)化的工藝，可以輕松解決以上難題,！
限制性內(nèi)切酶是一種能夠識(shí)別雙鏈DNA分子中特定核苷酸序列,，并在特定位置切割 DNA鏈中的磷酸二酯鍵的一類酶，簡稱限制酶,。不同的限制性內(nèi)切酶會(huì)識(shí)別不同的DNA 序列,，它可以在識(shí)別序列內(nèi)或距識(shí)別序列不遠(yuǎn)的位置處切割DNA，酶切之后會(huì)形成不同類型的產(chǎn)物,，如圖1中的BamHI形成5’粘性末端產(chǎn)物,，KpnI形成3’粘性末端產(chǎn)物，EcoRV形成平末端產(chǎn)物,。
圖1. BamHI,、KpnI、EcoRV 酶切示意圖
限制性內(nèi)切酶除了于分子克隆實(shí)驗(yàn)中外,，它還可以應(yīng)用于疫苗研發(fā)生產(chǎn),、基因測序、SNP鑒定,、ddPCR等領(lǐng)域,。
限制性內(nèi)切酶的命名主要是根據(jù)細(xì)菌的屬名、種名,、菌株或血清型,、發(fā)現(xiàn)的順序而定，以BstEII為例,，命名規(guī)則如下表一所示：
表1. 限制性內(nèi)切酶的命名規(guī)則
根據(jù)結(jié)構(gòu)的復(fù)雜程度,、作用方式與輔因子的區(qū)別，限制性內(nèi)切酶可分為四大類,，表2總結(jié)了各類的特點(diǎn)和典型酶種,。
表2. 不同限制性內(nèi)切酶的區(qū)別
除了以上分類，根據(jù)識(shí)別和切割位點(diǎn)的異同可以分為3類,，如下表3所示：
表3. 同裂酶,、異裂酶和同尾酶對(duì)比
針對(duì)目前市面上一些限制性內(nèi)切酶產(chǎn)品需要過夜酶切，花費(fèi)時(shí)間和精力,，并且還容易出現(xiàn)酶切產(chǎn)物不正確的情況,。翌圣FuniCut®快速限制性內(nèi)切酶為您排憂解難，通用緩沖液,，5 min完成精準(zhǔn)酶切,，讓您的酶切實(shí)驗(yàn)不再有煩惱!
快速酶切：5~15 min完成酶切，較常規(guī)酶切實(shí)驗(yàn)可減少1~2 h以上；
通用緩沖液：任意內(nèi)切酶組合都能用同一緩沖液,，多酶切反應(yīng)更簡便,，且兼容進(jìn)口品牌緩沖液（詳情戳鏈接）； 酶切效果：酶切效果同進(jìn)口品牌N*,、T*一致,； 直接電泳：提供紅色Color緩沖液，酶切產(chǎn)物可直接點(diǎn)膠電泳,，操作更簡便,；
精準(zhǔn)酶切：即使過夜酶切，星號(hào)活性也極低,。
圖2. 5 min高效完成單,、雙和三酶切效果圖
圖3. 與不同品牌buffer兼容的酶切效果圖
分別使用翌圣,、T*、N*品牌的HindIII,、NheI,、PstI、XbaI,、XhoI快速內(nèi)切酶,，以λDNA為底物，按照各品牌推薦的實(shí)驗(yàn)體系,，進(jìn)行過夜酶切（16 h）,，酶切產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。瓊脂糖凝膠電泳檢測結(jié)果表明翌圣限制性系列產(chǎn)品過夜酶切,，表現(xiàn)出超低的星號(hào)活性,。
圖4. 與不同品牌的限制性內(nèi)切酶產(chǎn)品過夜酶切效果
高度冗余，輕松應(yīng)對(duì)一定程度的過量底物
以 FuniCut® EcoRI,、XbaI,、SacI快速限制性內(nèi)切酶，分別以1 μg,、1.5 μg質(zhì)粒為底物,，酶切5 min，酶切產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,。瓊脂糖凝膠電泳檢測結(jié)果表明翌圣限制性系列產(chǎn)品能輕松處理一定程度的過量底物,。
圖5. 分別酶切1,、1.5 μg底物的酶切效果圖
客戶分別使用N*品牌和翌圣的BamHI+XbaI對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)，結(jié)果表明翌圣限制性內(nèi)切酶產(chǎn)品效果媲美N*,。（來源于上?？蛻簦?/span>
圖6. N*品牌和翌圣的雙酶切效果圖
