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高分辨率熔解（HRM）是一種基于雙鏈DNA在升溫時的解鏈行為的差異來區(qū)分不同的PCR產物的新技術,。HRM技術的高分辨率使其得以區(qū)分即使是單個堿基的差異,，因此該技術得以廣泛應用于SNP分型、突變掃描,、種屬鑒定和DNA甲基化分析,，是目前經濟和快速的基因分型和突變篩查方法之一,。該有聲視頻攝錄于2010年維也納qPCR論壇,。主講人：AndreasMissel,Ph.D.AssociateDirector,R&D,QIAGENAndreasMissel博士在QIAGEN負責修飾與擴增技術與產品的開發(fā)，如用
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一,、實驗目的學習和掌握外源基因導入真核細胞的主要方法——脂質體介導的轉染,。了解外源基因進入的一般性方法，觀測外源蛋白的表達（綠色熒光蛋白）,，為染色準備實驗材料,。二、實驗原理上圖所示是脂質體介導轉染的示意圖,，它顯示了外源質粒進入細胞的一般過程,。外源基因進入細胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法和脂質體介導法和病毒介導法,。電擊法是在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質粒進入,；磷酸鈣法和脂質體法是利用不同的載體物質攜帶質粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進入細胞；病毒法是利用包裝了外源基因的病毒感染
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大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備、重組DNA的轉化,、克隆篩選
1.實驗目的和要求通過本實驗學習氯化鈣法制備大腸桿菌感受態(tài)細胞和外源質粒DNA轉入受體菌細胞的技術以及篩選轉化體的技術,。了解細胞轉化的概念及其在分子生物學研究中的意義。2.相關知識及原理感受態(tài)細胞（Competentcells）：受體細胞經過一些特殊方法（如：CaCl2,，RuCl等化學試劑法）的處理后，細胞膜的通透性發(fā)生變化,，成為能容許多有外源DNA的載體分子通過的感受態(tài)細胞（competentcell）,。轉化（transformation）：是將異源DNA分子引入一細胞株系，使受體細胞獲得新的 -
1.RNA提取的樣品很重要，包括樣品的質量,，細胞數(shù),，雜質含量等等，建議：按照說明書的要求,，每毫升TRIzol不超過100mg再低些在50mg左右;樣品的質量一定要控制好,；研磨得時間不宜過長，成粉狀即可，液氮常加（研磨的意義主要是使細胞與TRIzol的作用更充分,，如有團塊挑出取質舍量）,；作用時間15分鐘；2.氯仿抽提,，一定要混勻,，劇烈些沒關系。但一定要充分作用,；3.異丙醇沉淀,，混勻，冰上操作會在一定程度上增加RNA產量,；4.75%乙醇清洗一次即可,，速度我一般選擇高速8000g-10000g之間的，
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具體的提取步驟如下:1.樣品加氯仿分層后,移去上層水相（該水相里就是RNA,，可照常繼續(xù)進行RNA的提取）,加0.3ml乙醇沉淀中間層和有機相中的DNA,，渦旋混合,，室溫放置3分鐘，2-8℃不超過2000×g離心5分鐘,?！咀ⅲ哼@一步同時可以除去未*消化的殘渣】2.小心吸出沉淀后的上清，加1.5ml異丙醇沉淀蛋白質,。室溫放置10分鐘,，2-8℃12000×g離心10分鐘棄上清。3.加2ml含0.3M鹽酸胍的95%乙醇洗滌蛋白質沉淀,。室溫放置20分鐘,，2-8℃7500×g離心5分鐘，棄上清,，重復兩次,。【注
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找質粒,載體圖譜及序列的方法1.Vectorpedia：輸入質粒骨架，直接查詢,，非常方便;http://www.addgene.org/pgvec1?f=v&cmd=listvecinfo2.google檢索式子：質粒名＋map質粒名＋sequence＋filetype:txtorfiletype:pdf或者：進入google,，點擊"圖片搜索",，直接查找圖譜.3.googlescholar:http://scholar.google.com/有些質粒是經過改造的，所以通過上述方法不能查詢到相應信
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瓊脂（Agar）,，又名瓊膠,、菜燕、凍粉,，是一類從石花菜及其它紅藻類（Rhodophyceae）植物提取出來的藻膠（phycocottoid）,，在我國及日本已有三百多年（1658年）的歷史。瓊脂糖Agarose,，縮寫為AG,，是瓊脂中不帶電荷的中性組成成份，也譯為瓊膠素或瓊膠糖,。瓊膠糖化學結構由β-D-吡喃半乳糖（1-4）連接3,6-脫水α-L-吡喃半乳糖基單位構成.用途:瓊脂,、瓊脂糖因為有特殊的膠凝性質，尤其有顯著的穩(wěn)固性,、滯度和滯后性,，并且易吸收水分，有特殊的穩(wěn)定效應,；已經廣泛使用于食用,、醫(yī)藥、
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英國Oxoid-LP0021酵母粉|YeastExtract-英國Oxoid-LP0021500g酵母粉|YeastExtract干酵母的自溶產物,富含氨基氮和維生素,優(yōu)其是水溶性維生素B復合物的含量豐富.它是許多培養(yǎng)基的組份之一,也常用于發(fā)酵肉湯以促進細菌的生長.當需要細菌快速,大量繁殖時,也推薦使用.成份分析（每批平均）:（%W/W）總氮:10.9氨氮:5.3氯化鈉:0.3pH（2%溶液）:7.0英國Oxoid-LP0021酵母粉YeastExtract英國Oxoid-LP0021酵母粉Ye
