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高分辨率熔解（HRM）是一種基于雙鏈DNA在升溫時的解鏈行為的差異來區(qū)分不同的PCR產(chǎn)物的新技術(shù),。HRM技術(shù)的高分辨率使其得以區(qū)分即使是單個堿基的差異,，因此該技術(shù)得以廣泛應用于SNP分型,、突變掃描,、種屬鑒定和DNA甲基化分析,，是目前經(jīng)濟和快速的基因分型和突變篩查方法之一,。該有聲視頻攝錄于2010年維也納qPCR論壇,。主講人：AndreasMissel,Ph.D.AssociateDirector,R&D,QIAGENAndreasMissel博士在QIAGEN負責修飾與擴增技術(shù)與產(chǎn)品的開發(fā),，如用
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一、實驗目的學習和掌握外源基因?qū)胝婧思毎闹饕椒ā|(zhì)體介導的轉(zhuǎn)染,。了解外源基因進入的一般性方法,，觀測外源蛋白的表達（綠色熒光蛋白），為染色準備實驗材料,。二,、實驗原理上圖所示是脂質(zhì)體介導轉(zhuǎn)染的示意圖，它顯示了外源質(zhì)粒進入細胞的一般過程,。外源基因進入細胞主要有四種方法：電擊法,、磷酸鈣法和脂質(zhì)體介導法和病毒介導法。電擊法是在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質(zhì)粒進入,；磷酸鈣法和脂質(zhì)體法是利用不同的載體物質(zhì)攜帶質(zhì)粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進入細胞,；病毒法是利用包裝了外源基因的病毒感染
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大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備,、重組DNA的轉(zhuǎn)化、克隆篩選
1.實驗目的和要求通過本實驗學習氯化鈣法制備大腸桿菌感受態(tài)細胞和外源質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)入受體菌細胞的技術(shù)以及篩選轉(zhuǎn)化體的技術(shù),。了解細胞轉(zhuǎn)化的概念及其在分子生物學研究中的意義,。2.相關(guān)知識及原理感受態(tài)細胞（Competentcells）：受體細胞經(jīng)過一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl等化學試劑法）的處理后,，細胞膜的通透性發(fā)生變化,，成為能容許多有外源DNA的載體分子通過的感受態(tài)細胞（competentcell）。轉(zhuǎn)化（transformation）：是將異源DNA分子引入一細胞株系,，使受體細胞獲得新的 -
1.RNA提取的樣品很重要,，包括樣品的質(zhì)量,，細胞數(shù)，雜質(zhì)含量等等,，建議：按照說明書的要求,，每毫升TRIzol不超過100mg再低些在50mg左右;樣品的質(zhì)量一定要控制好；研磨得時間不宜過長,，成粉狀即可,，液氮常加（研磨的意義主要是使細胞與TRIzol的作用更充分，如有團塊挑出取質(zhì)舍量）,；作用時間15分鐘,；2.氯仿抽提，一定要混勻,，劇烈些沒關(guān)系,。但一定要充分作用,；3.異丙醇沉淀，混勻,，冰上操作會在一定程度上增加RNA產(chǎn)量,；4.75%乙醇清洗一次即可，速度我一般選擇高速8000g-10000g之間的,，
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具體的提取步驟如下:1.樣品加氯仿分層后,移去上層水相（該水相里就是RNA，可照常繼續(xù)進行RNA的提?。?加0.3ml乙醇沉淀中間層和有機相中的DNA,，渦旋混合，室溫放置3分鐘,，2-8℃不超過2000×g離心5分鐘,。【注：這一步同時可以除去未*消化的殘渣】2.小心吸出沉淀后的上清,，加1.5ml異丙醇沉淀蛋白質(zhì),。室溫放置10分鐘,，2-8℃12000×g離心10分鐘棄上清,。3.加2ml含0.3M鹽酸胍的95%乙醇洗滌蛋白質(zhì)沉淀。室溫放置20分鐘,，2-8℃7500×g離心5分鐘,，棄上清，重復兩次,?！咀?/div>找質(zhì)粒,載體圖譜及序列的方法1.Vectorpedia：輸入質(zhì)粒骨架,，直接查詢，非常方便;http://www.addgene.org/pgvec1?f=v&cmd=listvecinfo2.google檢索式子：質(zhì)粒名＋map質(zhì)粒名＋sequence＋filetype:txtorfiletype:pdf或者：進入google,，點擊"圖片搜索",，直接查找圖譜.3.googlescholar:http://scholar.google.com/有些質(zhì)粒是經(jīng)過改造的，所以通過上述方法不能查詢到相應信
原裝西班牙瓊脂糖Biowest aga技術(shù)參數(shù)
瓊脂（Agar）,，又名瓊膠,、菜燕、凍粉,，是一類從石花菜及其它紅藻類（Rhodophyceae）植物提取出來的藻膠（phycocottoid）,，在我國及日本已有三百多年（1658年）的歷史,。瓊脂糖Agarose，縮寫為AG,，是瓊脂中不帶電荷的中性組成成份,，也譯為瓊膠素或瓊膠糖。瓊膠糖化學結(jié)構(gòu)由β-D-吡喃半乳糖（1-4）連接3,6-脫水α-L-吡喃半乳糖基單位構(gòu)成.用途:瓊脂,、瓊脂糖因為有特殊的膠凝性質(zhì),，尤其有顯著的穩(wěn)固性、滯度和滯后性,，并且易吸收水分,，有特殊的穩(wěn)定效應；已經(jīng)廣泛使用于食用,、醫(yī)藥,、英國OXOID 酵母粉LP0021技術(shù)參數(shù)
英國Oxoid-LP0021酵母粉|YeastExtract-英國Oxoid-LP0021500g酵母粉|YeastExtract干酵母的自溶產(chǎn)物,富含氨基氮和維生素,優(yōu)其是水溶性維生素B復合物的含量豐富.它是許多培養(yǎng)基的組份之一,也常用于發(fā)酵肉湯以促進細菌的生長.當需要細菌快速,大量繁殖時,也推薦使用.成份分析（每批平均）:（%W/W）總氮:10.9氨氮:5.3氯化鈉:0.3pH（2%溶液）:7.0英國Oxoid-LP0021酵母粉YeastExtract英國Oxoid-LP0021酵母粉Ye
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