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關(guān)鍵詞：自身免疫性疾病,，系統(tǒng)性紅斑狼瘡（Systemic lupus erythematosus, SLE）,，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis, RA) ，銀屑?。≒soriasis）,，白血病（leukemia）,，PBMC

隨著生物技術(shù)的飛速發(fā)展,，人體免疫系統(tǒng)在疾病治療、藥物發(fā)展中的作用越來越明顯,。外周血單個(gè)核細(xì)胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells,，PBMC）作為免疫系統(tǒng)的重要組成部分，其在自身免疫性疾病及白血病等疾病的發(fā)病機(jī)制中扮演著關(guān)鍵角色,。

一,、外周血單個(gè)核細(xì)胞簡介

外周血單個(gè)核細(xì)胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells，PBMC）是外周血中具有單個(gè)核的細(xì)胞的混合群體，主要包括淋巴細(xì)胞（T細(xì)胞,、B細(xì)胞和NK細(xì)胞等）,、單核細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞。PBMC通過血液循環(huán)分布到全身各組織器官中,，參與機(jī)體的免疫應(yīng)答和免疫調(diào)節(jié),。

PBMC中大部分是淋巴細(xì)胞，包括T細(xì)胞,、B細(xì)胞和NK細(xì)胞等,。其中T淋巴細(xì)胞在胸腺中發(fā)育成熟，執(zhí)行人體的細(xì)胞免疫功能,，在免疫監(jiān)視中發(fā)揮重要作用,；B淋巴細(xì)胞執(zhí)行體液免疫功能，受抗原刺激后能發(fā)育為漿細(xì)胞分泌抗體,；NK細(xì)胞即自然殺傷細(xì)胞,，是非特異性免疫細(xì)胞，也在免疫監(jiān)視中發(fā)揮著重要作用,。單核細(xì)胞屬于白細(xì)胞,，是一種髓系免疫細(xì)胞，可分化為巨噬細(xì)胞或樹突狀細(xì)胞,，參與先天免疫和抗原呈遞,。樹突狀細(xì)胞也是免疫系統(tǒng)中的一種重要細(xì)胞，主要存在于淋巴組織和血液中,，其主要功能是通過吞噬,、處理和呈遞抗原，啟動(dòng)和調(diào)控免疫應(yīng)答,。

由此可見,，PBMC中各細(xì)胞亞群“各司其職”，共同構(gòu)成了人體的免疫屏障,。作為免疫系統(tǒng)的重要組成部分，PBMC數(shù)量和功能的變化不僅可以反映機(jī)體的免疫狀態(tài),，而且與多種疾病的發(fā)生和發(fā)展有關(guān),。比如自身免疫性疾病是一類由于機(jī)體免疫系統(tǒng)對自身組織發(fā)生免疫反應(yīng)而導(dǎo)致的疾病，而PBMC中的不同細(xì)胞類型在這一過程中發(fā)揮著不同的作用,。另外,，白血病的發(fā)生和發(fā)展不僅與癌細(xì)胞本身有關(guān)，還與周圍的免疫微環(huán)境密切相關(guān),。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn),，PBMC在免疫微環(huán)境中的作用不容忽視，它們可以通過分泌各種細(xì)胞因子和趨化因子來影響白血病細(xì)胞的行為。因此,，在自身免疫性疾病及白血病研究中,，PBMC是重要的原材料，通過研究疾病狀態(tài)下PBMC中不同免疫細(xì)胞的功能狀態(tài)和數(shù)量改變,，可以更好地理解自身免疫性疾病和白血病的發(fā)病機(jī)制,，并為疾病的診斷、監(jiān)測和治療提供新的思路和方法,。

二,、自身免疫性疾病與PBMC的研究

 自身免疫性疾病是指機(jī)體對自身抗原發(fā)生免疫反應(yīng)而導(dǎo)致自身組織損害所引起的疾病，常見的有系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic Lupus Erythematosus, SLE),、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis, RA)和銀屑?。≒soriasis）等。

自身免疫性疾病的發(fā)生與免疫系統(tǒng)的異常激活有關(guān),。正常情況下,，免疫系統(tǒng)能夠區(qū)分自身和非自身的抗原，但在自身免疫性疾病中,，這種識別機(jī)制出現(xiàn)故障,，導(dǎo)致免疫系統(tǒng)錯(cuò)誤地攻擊自身組織，而PBMC中的不同細(xì)胞類型則在這一過程中發(fā)揮著不同的作用,。

【系統(tǒng)性紅斑狼瘡】

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（Systemic lupus erythematosus, SLE）是一種慢性自身免疫性疾病,，以炎癥和免疫介導(dǎo)的多器官系統(tǒng)損傷為特征，包括皮膚黏膜系統(tǒng),、肌肉骨骼系統(tǒng),、血液系統(tǒng)和腎臟系統(tǒng)。全-世界約有340萬人被診斷為系統(tǒng)性紅斑狼瘡,。

流行病學(xué)：中國大陸地區(qū)SLE患病率約為30~70個(gè)/10萬,，男女患病比為1:10~12，好發(fā)于育齡期女性,，多為15~40歲,。

臨床表現(xiàn)：具有高度異質(zhì)性，系統(tǒng)受累表現(xiàn)多樣,，病程和疾病嚴(yán)重程度不一,。全身癥狀包括發(fā)熱、疲乏和體重下降,；特異性狼瘡皮膚損害的典型表現(xiàn)為面頰部蝶形紅斑,，亦可表現(xiàn)為亞急性皮膚型狼瘡和慢性皮膚型狼瘡；關(guān)節(jié)受累表現(xiàn)為對稱分布的非侵蝕性關(guān)節(jié)痛和關(guān)節(jié)炎,，通常累及雙手小關(guān)節(jié),、腕關(guān)節(jié)和膝關(guān)節(jié),；此外，神經(jīng)系統(tǒng),、心,、肺，消化系統(tǒng)等均可被累及,。

發(fā)病機(jī)制：系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）的發(fā)病機(jī)制是多方面的,，涉及遺傳、環(huán)境,、激素水平和免疫系統(tǒng)的異常,。PBMC中不同的細(xì)胞參與SLE的發(fā)病機(jī)制（圖1）

圖1 系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病機(jī)制（來源：Immunopathogenesis of systemic lupus erythematosus: An update）

·樹突狀細(xì)胞（DCs）識別和內(nèi)化自身抗原，如核酸,、免疫復(fù)合物,、凋亡細(xì)胞碎片（K）。

·自體抗原呈遞給自身反應(yīng)性T細(xì)胞,，導(dǎo)致其活化和增殖（L）,。

·人漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞（pDCs）在調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答中起著至關(guān)重要的作用，并且在SLE的發(fā)病機(jī)制中起著至關(guān)重要的作用(M),。

·巨噬細(xì)胞通過各種機(jī)制參與SLE的發(fā)病機(jī)制(N),。

·B細(xì)胞功能異常，包括B細(xì)胞受體信號的改變,、B細(xì)胞耐受機(jī)制的缺陷,、B細(xì)胞凋亡受損和B細(xì)胞亞群的失調(diào)，都是SLE的發(fā)病機(jī)制(P),。

·CD4+ T細(xì)胞與自身反應(yīng)性B細(xì)胞相互作用,，激活并分化為產(chǎn)生抗體的細(xì)胞(R)

·Tregs的功能和數(shù)量改變有助于免疫耐受的破壞，表現(xiàn)為抑制能力降低,、生存受損和對細(xì)胞因子的反應(yīng)性改變(S),。

【類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎】

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis, RA) 是一種慢性自身免疫性疾病，會(huì)導(dǎo)致關(guān)節(jié)炎癥和疼痛,，影響身體多個(gè)系統(tǒng),，給患者帶來了極大的痛苦和生活不便。

流行病學(xué)：我國RA的患病率為0.42%,，患者總數(shù)約500萬,，男女比約為1∶4。多數(shù)患者為女性,，且疾病的發(fā)病年齡多在20～55歲之間。

臨床表現(xiàn)：滑膜炎,，并逐漸出現(xiàn)關(guān)節(jié)軟骨和骨破壞,，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形和功能喪失,，可并發(fā)肺部疾病、心血管疾病,、惡性腫瘤,、骨折及抑郁癥等。

發(fā)病機(jī)制：目前RA具體的發(fā)病機(jī)制目前尚未完-全清晰,，一般認(rèn)為是遺傳,、環(huán)境、免疫系統(tǒng)等多種因素相互作用的結(jié)果,。遺傳易感性和環(huán)境因素可能導(dǎo)致自我耐受破壞,，引起系統(tǒng)性自身免疫反應(yīng)，從而導(dǎo)致軟骨和骨骼的破壞,。PBMC中的T細(xì)胞和B細(xì)胞參與RA的發(fā)病機(jī)制（圖2）：

圖2 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制（來源：Update on the Pathomechanism, Diagnosis,and Treatment Options for Rheumatoid Arthritis）

RA患者中T細(xì)胞過度活化,，分泌大量的炎癥因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）,、白細(xì)胞介素-1（IL-1）和白細(xì)胞介素-6（IL-6）等,，導(dǎo)致關(guān)節(jié)滑膜的炎癥反應(yīng)。B細(xì)胞則產(chǎn)生針對自身組織的抗體,，如類風(fēng)濕因子（RF）和抗環(huán)瓜氨酸多肽抗體（ACPA）,。這些抗體與自身抗原形成免疫復(fù)合物，沉積在關(guān)節(jié)滑膜中,，進(jìn)一步激活補(bǔ)體系統(tǒng),，引發(fā)炎癥和組織損傷。隨著炎癥的持續(xù)和加重,，關(guān)節(jié)滑膜逐漸增厚,，形成血管翳，侵蝕軟骨和骨組織,，導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形和功能障礙,。

【銀屑病】

銀屑病（Psoriasis）俗稱“牛皮癬”,，是一種由環(huán)境因素刺激,、多基因遺傳控制、免疫介導(dǎo)的慢性,、復(fù)發(fā)性,、炎癥性、系統(tǒng)性疾病,，無傳染性,，需終身治療，嚴(yán)重影響患者的身心健康和生活質(zhì)量,。

流行病學(xué)：2008年中國6省市銀屑病流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果為0.47%,，歐美國家的患病率為2% ~ 4%,，可發(fā)生于任何年齡，約2/3的患者在40歲以前發(fā)病,。大部分患者冬重夏輕,，部分患者無明顯季節(jié)性。

臨床表現(xiàn)：典型臨床表現(xiàn)為局限或廣泛分布的鱗屑性紅斑或斑塊,，可伴有瘙癢,、疼痛等不適癥狀，最常累及頭皮,、肘膝,、小腿、臀部等部位,，也可波及指（趾）甲,。

發(fā)病機(jī)制：銀屑病的確切病因與發(fā)病機(jī)制尚未完-全闡明。發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜,通常是遺傳背景,、環(huán)境誘因,、免疫應(yīng)答異常等因素相互作用，最終導(dǎo)致角質(zhì)形成細(xì)胞異常增殖和/或關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞與軟骨細(xì)胞的炎癥反應(yīng),。PBMC在銀屑病的發(fā)病機(jī)制中有重要作用（圖3）,。

圖3 銀屑病發(fā)病機(jī)制（來源：Inflammation and Psoriasis: A Comprehensive Review）

在銀屑病發(fā)病機(jī)制中重要的細(xì)胞是樹突狀細(xì)胞（DC)、Th17,、Th1和角質(zhì)形成細(xì)胞,。DC被各種刺激激活過度產(chǎn)生和分泌TNF-α和IL-23也包括IL-12。IL-23誘導(dǎo)幼稚T細(xì)胞分化為Th17,?；罨腡h17細(xì)胞過度產(chǎn)生IL-17和IL-22。TNF-a 和 IL-17 激活角質(zhì)形成細(xì)胞,，促進(jìn)表皮增生,，募集炎癥細(xì)胞（如中性粒細(xì)胞），并誘導(dǎo)抗菌肽 （AMP） 的產(chǎn)生,。DC產(chǎn)生的IL-12也誘導(dǎo)Th1,，Th1產(chǎn)生細(xì)胞因子，包括IFN-γ,。這種不規(guī)則的免疫反應(yīng)隨著TNF-α激活樹突狀細(xì)胞而持續(xù),。

此外，有相關(guān)研究顯示[4],，銀屑病患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中CD4+T細(xì)胞,、CD8+T細(xì)胞和Tregs細(xì)胞的頻率與正常人相當(dāng)，而Th17細(xì)胞,、Tc1細(xì)胞和Tc17細(xì)胞的頻率在銀屑病患者中升高,。銀屑病患者外周血NKT細(xì)胞和CD69+iNKT細(xì)胞頻率明顯降低,。這些研究結(jié)果提示PBMC中這些細(xì)胞亞群可能在銀屑病的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮著重要作用。

三,、白血病與PBMC的研究

除了和自身免疫性疾病息息相關(guān)外，PBMC作為外周血中重要的細(xì)胞群,，在血液系統(tǒng)相關(guān)疾病中也有重要的作用,，比如白血病。白血?。╨eukemia）是一種源于造血干細(xì)胞的惡性克隆性疾病,，其特征是白血病細(xì)胞在骨髓和其他造血組織中的異常增殖，這導(dǎo)致正常造血功能受到抑制并可能浸潤到其他器官,。根據(jù)細(xì)胞分化程度和病程,，白血病可分為急性和慢性，以及淋巴細(xì)胞和非淋巴細(xì)胞白血病,。常見類型包括急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）、急性髓系白血?。ˋML）,、慢性髓系白血病（CML） 和慢性淋巴細(xì)胞白血?。–LL）,。

流行病學(xué)：我國AML的發(fā)病率約為1.62/10萬，而ALL則約為0.69/10萬,。成人以AML多見,，兒童以ALL多見。2022年9月,，首-個(gè)針對中國兒童和青少年癌癥發(fā)病率和衛(wèi)生服務(wù)可及性現(xiàn)狀的研究在《Lancet》發(fā)表,，研究稱，2018~2020年,，在兒童所有惡性腫瘤中,，白血病的發(fā)病率排-名第-一，發(fā)病率為42.33/百萬,；在青少年所有惡性腫瘤中,，白血病發(fā)病率排-名第-二，發(fā)病率為30.08/百萬,。

臨床表現(xiàn)：貧血,、出血、發(fā)熱,、疲乏,、體重減輕,、面色蒼白、瘀斑,、淋巴結(jié)和肝脾腫大,、骨骼和關(guān)節(jié)腫痛、呼吸困難,、眩暈,、心悸和反復(fù)感染。

發(fā)病機(jī)制：白血病的發(fā)病機(jī)制涉及多個(gè)方面,，包括遺傳因素,、物理因素、化學(xué)因素,、病毒感染以及免疫功能異常等,。白血病患者PBMC中的淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的功能狀態(tài)、數(shù)量比例等可能會(huì)發(fā)生改變,。研究人員對AML患者和正常人外周血樣本中各類免疫細(xì)胞占比進(jìn)行統(tǒng)計(jì)（圖4與圖5）,，結(jié)果顯示AML 患者中占比較高的免疫細(xì)胞類型是單核細(xì)胞（紫色），且淋巴細(xì)胞比例顯著下降,。

圖4 AML患者外周血各類免疫細(xì)胞占比

圖5 正常人外周血各類免疫細(xì)胞占比（來源：基于單細(xì)胞測序的急性髓系白血病免疫細(xì)胞異質(zhì)性研究）

綜上所述,，外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）在自身免疫性疾病（如系統(tǒng)性紅斑狼瘡,、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和銀屑病等）及白血病等疾病的發(fā)病機(jī)制中扮演著重要的角色,，這也使得PBMC成為研究這些疾病的重要的原材料。通過研究疾病狀態(tài)下PBMC中不同免疫細(xì)胞的功能狀態(tài)和數(shù)量改變,，有助于深入了解自身免疫性疾病及白血病的發(fā)生和發(fā)展,，并為該類疾病的診斷、靶向治療和預(yù)后評估提供理論依據(jù),。

四,、IPHASE相關(guān)產(chǎn)品

鑒于此，IPHASE作為體外研究生物試劑引-領(lǐng)者,，憑借先進(jìn)的設(shè)備,，專業(yè)的技術(shù)人員和多年研發(fā)的經(jīng)驗(yàn)，繼推出健康人,、猴,、犬、大鼠,、小鼠,、豬、兔、貓等不同種屬的PBMC后,，又開發(fā)出系統(tǒng)性紅斑狼瘡,、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病及白血病等病人的PBMC,，可為該類疾病的研究提供重要的生物學(xué)材料,。

【人PBMC產(chǎn)品】

 健康人PBMC、系統(tǒng)性紅斑狼瘡病人PBMC,、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人PBMC,、銀屑病病人PBMC、白血病病人PBMC

【動(dòng)物PBMC產(chǎn)品】

猴PBMC,、犬PBMC、大鼠PBMC,、小鼠PBMC,、小型豬PBMC、兔PBMC,、貓PBMC

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參考資料：

[1] Laurent Arnaud , Fran?ois Chasset , Thierry Martin. Immunopathogenesis of systemic lupus erythematosus: An update. Autoimmun Rev. 2024, 23(10):103648.

[2] Yen-Ju Lin , Martina Anzaghe , Stefan Schülke. Update on the Pathomechanism, Diagnosis, and Treatment Options for Rheumatoid Arthritis. Cells. 2020, 9(4):880.

[3] Alessandra-M?d?lina Man , Meda Sandra Or?san , Oana-Alina Hoteiuc, etc. Inflammation and Psoriasis: A Comprehensive Review.Int J Mol Sci. 2023,24(22):16095.

[4] Yifan Hu , Youdong Chen , Zeyu Che,etc. Dysregulated Peripheral Invariant Natural Killer T Cells in Plaque Psoriasis Patients.Front Cell Dev Biol. 2022, 9:799560.

[5] 李天欣. 基于單細(xì)胞測序的急性髓系白血病免疫細(xì)胞異質(zhì)性研究[D]. 哈爾濱工業(yè)大學(xué). 2020.

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• PBMC丨PBMC細(xì)胞丨外周血單個(gè)核細(xì)胞

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