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胰腺病毒的凍干工藝研究

隨著基因治療研究的逐漸深入,，作為其基礎(chǔ)的病毒載體研究也有了突飛猛進(jìn)的發(fā)展,。采用病毒載體的基因轉(zhuǎn)移技術(shù)治療人類(lèi)疾病也從實(shí)驗(yàn)室研究逐步進(jìn)入到臨床試驗(yàn)階段。腺病毒因其對(duì)人致病性小且不誘導(dǎo)癌變,，宿主細(xì)胞廣,，繁殖度高，裝載容量大,，越來(lái)越多的應(yīng)用于病毒載體的研究,。但是腺病毒制品對(duì)溫度較為敏感，給運(yùn)輸,、保存帶來(lái)較大困難,，這在很大程度上限制了其在臨床上的應(yīng)用。

冷凍干燥技術(shù)廣泛應(yīng)用于食品,、醫(yī)藥,、疫苗等，采用此技術(shù)可較好地保持產(chǎn)品原有的理化性質(zhì)和生物活性,，且有效成分損失極少,，產(chǎn)品因含水量低而易于長(zhǎng)期保存,。近年來(lái)，國(guó)外陸續(xù)出現(xiàn)將冷凍干燥技術(shù)應(yīng)用到病毒疫苗及腺病毒制劑研究中的報(bào)道,。目前腺病毒的保存條件為 PBS緩沖液于 -20 ℃以下保存,，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，在這種條件下的腺病毒在25 ℃保存8 h及4 ℃保存24 h活性均下降10倍左右,。研究胰腺病毒的凍干技術(shù),，有利于更好地方便臨床應(yīng)用。

1,、材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.2 蔗糖（分析純）,；甘露醇注射液（藥用輔料）；明膠（BR,，上海明膠廠）,；L- 半胱氨酸（原料藥）；人血白蛋白,。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

FD-503冷凍干燥機(jī),。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

采用冷凍干燥方法，先將制品在 -40 ℃條件下預(yù)凍至 -35 ℃,，真空度為10Pa以下,，每2 h溫度上升5℃，至28℃左右保持3 h,。凍干保護(hù)劑組分為 ：4% 明膠,、5% 甘露醇、20%人血白蛋白及3%蔗糖,。

3 結(jié)論

凍干過(guò)程一般包括預(yù)凍,、升華干燥（第一階段干燥）、解吸干燥（第二階段干燥）,。在研究腺病毒的凍干時(shí),，預(yù)凍十分重要，在預(yù)凍階段,，降溫速度越快越好,，這主要還是由凍干機(jī)的降溫性能決定的，而在此階段中,，要掌握適宜的預(yù)凍時(shí)間,，以確保抽真空之前所有的產(chǎn)品均已凍實(shí)，這樣就不致因抽真空而噴瓶,，并且能減少“粗結(jié)晶”的出現(xiàn),，最終利于水分的控制。而在升華干燥階段，最關(guān)鍵的是要考慮在適宜的時(shí)間內(nèi)使制品干燥成型,，那就必須獲得最適宜的熱量以確保腺病毒制品的升華,，這與真空度密切相關(guān)。真空度 <10 Pa,，并在升華干燥階段將制品溫度維持在 5 ℃為最好,。在解吸干燥階段，主要是去除產(chǎn)品的結(jié)合水分,，應(yīng)盡量將產(chǎn)品溫度迅速上升到設(shè)定的最高溫度,，溫度過(guò)低，不能控制水分,，溫度過(guò)高,，對(duì)于腺病毒來(lái)說(shuō)，又有失活的可能,，在此階段將制品溫度維持在 28 ℃左右是最佳的,。

• 實(shí)驗(yàn)室真空冷凍干燥機(jī)

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