SILAC代謝標(biāo)記定量實(shí)驗(yàn)服務(wù)

實(shí)驗(yàn)技術(shù)簡(jiǎn)介: SIL AC的基本原理是分別用天然同位素(輕型)或穩(wěn)定同位素(重型)標(biāo)記的必需氨基酸取代細(xì)胞培養(yǎng)基中相應(yīng)氨基酸,，細(xì)胞經(jīng)5-6個(gè)倍增周期后，穩(wěn)定同位素標(biāo)記的氨基酸*摻入到細(xì)胞新合成的蛋白質(zhì)中替代了原有氨基酸,。不同標(biāo)記細(xì)胞的裂解蛋白按細(xì)胞數(shù)或蛋白量等比例混合,，經(jīng)分離、純化后進(jìn)行質(zhì)譜鑒定,，根據(jù)一級(jí)質(zhì)譜圖中兩個(gè)同位 素型肽段的面積比較進(jìn)行相對(duì)定量,。屬于體內(nèi)代謝標(biāo)記法。

實(shí)驗(yàn)操作流程:

1,、蛋白提取和樣品制備

2,、標(biāo)記效率測(cè)試

3,、樣品混臺(tái)

4、SDS-PAGE分級(jí)

5,、酶解

6,、質(zhì)譜鑒定

7、軟件分析

8,、定性定量蛋白質(zhì)組結(jié)果

9,、生物信息學(xué)數(shù)據(jù)挖掘和統(tǒng)計(jì)分析

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):

客戶提供:

1、蛋白質(zhì)提取物:濃度>1μg/ul, 蛋白質(zhì)總量>300μg.

2,、細(xì)胞:通過細(xì)胞計(jì)數(shù)取不少于2x106個(gè)細(xì)胞于EP管,，加入0 5ml生理鹽水或蛋白保護(hù)劑，混勻后保存于冰箱(-80°C,， 避免反復(fù)凍融),。

交付標(biāo)準(zhǔn):

1、蛋白質(zhì)鑒定和SIL AC定量分析結(jié)果;

2,、客戶蛋白質(zhì)對(duì)應(yīng)的質(zhì)譜峰圖;

3,、SIL AC實(shí)驗(yàn)完整的實(shí)驗(yàn)步驟、使用儀器,、軟件檢索參數(shù)等,。

其他:

1、SILAC是體內(nèi)標(biāo)記技術(shù),，穩(wěn)定同位素標(biāo)記的氨基酸與天然氨基酸化學(xué)性質(zhì)基本相同,，所標(biāo)記的細(xì)胞和未標(biāo)記細(xì)胞在生物學(xué)行為上幾乎沒有差異，標(biāo)記效率可高達(dá)100%,。

2,、采用質(zhì)譜定量,定量結(jié)果準(zhǔn)確且批次變異小、重復(fù)性好,。

3,、體內(nèi)代謝標(biāo)記與SDS- PAGE或色譜分離技術(shù)相結(jié)合，兼容疏水性蛋白和偏堿性蛋白,，不受蛋白性質(zhì)限制,。

4、多個(gè)樣品混合后同時(shí)進(jìn)行分離,、酶切和鑒定,后續(xù)實(shí)驗(yàn)對(duì)樣品的影響一致,， 減少了實(shí)驗(yàn)操作和儀器設(shè)備產(chǎn)生的影響。

5,、由于該技術(shù)屬于體內(nèi)標(biāo)記，標(biāo)記效果穩(wěn)定,，其標(biāo)記效率不受裂解液的影響,，不僅適合于進(jìn)行全細(xì)胞蛋白的分析,，還適合于膜蛋白的鑒定和定量。

6,、與化學(xué)標(biāo)記相比,，SIL AC方法蛋白需要量明顯減少，通常每個(gè)樣品只需要幾十微克的蛋白量,。

7,、活體標(biāo)記，更接近樣品真實(shí)狀態(tài),。

8,、只適用于活體培養(yǎng)的細(xì)胞，對(duì)于生物醫(yī)學(xué)研究中常用的組織樣品,，體液樣品等無法分析,對(duì)于動(dòng)物模型的標(biāo)記成本太大,，無法實(shí)現(xiàn)。與體外標(biāo)記技術(shù)相比,，SIL AC屬于體內(nèi)標(biāo)記,，具有以下技術(shù)優(yōu)勢(shì)

1、高通量,，可同時(shí)鑒定并定量數(shù)百至數(shù)千種蛋白質(zhì);

2,、定量精確，降低由于樣品制備不同而造成的實(shí)驗(yàn)差異;

3,、線性定量范圍廣;

4,、靈敏度更高，蛋白質(zhì)需要量明顯減少;

5,、標(biāo)記采用的是體內(nèi)標(biāo)記技術(shù),，更接近樣品真實(shí)狀態(tài)。

SILAC技術(shù)服務(wù)內(nèi)容

1,、細(xì)胞同位素標(biāo)記;

3,、SDS-PAGE分離;

4、胰酶酶切后液相分離和質(zhì)譜分析;

5,、數(shù)據(jù)庫檢索及蛋白質(zhì)定量分析;

6,、差異蛋白的生物信息學(xué)分析;

7、實(shí)驗(yàn)報(bào)告提交,。

實(shí)驗(yàn)服務(wù)報(bào)告內(nèi)容

1,、蛋白定鑒定和SIL AC定量分析結(jié)果;

2、顧客蛋白質(zhì)對(duì)應(yīng)的質(zhì)譜峰圖;

3,、SIL AC實(shí)驗(yàn)完整的實(shí)驗(yàn)步驟,、使用儀器、軟件檢索參數(shù)等。

技術(shù)服務(wù)優(yōu)勢(shì)

1,、靈敏度高,，檢測(cè)限低，可檢測(cè)出低豐度蛋白;

2,、分離能力強(qiáng),，分析范圍廣，iITRAQ可以對(duì)任何類型的蛋白質(zhì)進(jìn)行分離鑒定,，包括高分子量蛋白質(zhì),、酸

性蛋白和堿性蛋白，膜蛋白和不溶性蛋白;

3,、高通量:同時(shí)對(duì)8個(gè)樣本進(jìn)行分析,，提高了實(shí)驗(yàn)通量，可同時(shí)對(duì)多個(gè)時(shí)間點(diǎn)或不同處理的蛋白質(zhì)進(jìn)行分析;

4,、結(jié)果可靠:定性與定量分析結(jié)果更加可靠;

5,、自動(dòng)化程度高:液相與質(zhì)譜連用，自動(dòng)化操作,，分析速度快,，分離效果好。

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)：