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產(chǎn)地類別	國產(chǎn)	應用領域	醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

探針合成實驗服務

探針是- -小段單鏈DNA或者RNA--片段(大約是20到500 bp),，用于檢測與其互補的核酸序列,。雙鏈DNA加熱變性成為單鏈，隨后用放射性同位素(通常用磷-32),、螢光染料或者酶 (如辣根過氧化物酶)標記成為探針,。

實驗材料

基因

試劑、試

劑盒

轉(zhuǎn)錄緩沖液DTT RNA酶抑制劑CTP ATP S-UTP乙酸銨乙醇

儀器,、耗

材

水溶鍋,、離心機、培養(yǎng)箱,、烘箱

實驗步驟

1.在一個含SP6. T3或T7啟動子的載體中,，插入目的基因。在編碼序列下游酶切使質(zhì)粒呈線

性,。DNAL以酚/氨0仿抽提,，乙醇沉淀，70%乙醇洗后晾干,。以無菌水重溶沉淀至1 ug/ul,。

2.室溫配置如下反應混合液(總體積20μl) :

(1) 4.0 ul 5x轉(zhuǎn)錄緩)沖液

(2) 0.2 ul 1 mol/ DTT

(3) 60 U RNA酶抑制劑

(4) 1.0 ul三種10 mmol/l NTP中的每-種

(5) 1.0 ul 1 ug/ul酶切DNA

(6) 10.0μ ζ[35s] UTP

(7) 16 U SP6或T7 RNA聚合酶

(8) 37*C溫育30 min,再加16 U聚合酶并于37 °C溫育40 min。

3.在反應混合液中加入: 60 U RNA酶抑制劑,，20 μl 10 mg/ml的載體RNA和1.0μl酶1,于37°C溫育10 min以除去摸板,。

4.往反應混合液加入以下液體: 0.8 ul 1 mol/l DTT. 63 μul 無菌水和10 μI3 mol/l乙酸鈉，取出1 ul測定其cpm/ul值,。

5.加36.4μ7.5 molM的乙酸銨于反應混合液(終濃度2 mol/)加50~100 ug tRNA載體和272ul冷無水乙醇,，置干冰上沉淀10 min,以冷70%乙醇洗沉淀，晾干,，需要的話可重復此步,。以100μl 10 mmol/l DTT重溶DNA沉淀。

6.確定其cpm/μl值,，并計算摻入百分比,，核糖核酸探針應于2~3天內(nèi)使用,。

(70%到90%的標記摻入，結(jié)果可得70~90 ng標記的RNA)

收費標準/服務周期/提供結(jié)果:

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