RIPA裂解液（中）說明書

RIPA Lysis Buffer

目錄號：K2334

 保存條件：4℃保存,。

 組分說明

 Cat. No.         K2334

Volume        100 ml

本產品僅供科研使用,，請勿用于臨床診斷及其他用途產品簡介

　　RIPA裂解液是一種傳統(tǒng)的組織以及細胞快速裂解液,，主要用于從動物組織和哺乳

動物細胞中抽取可溶性蛋白,，可用于裂解貼壁細胞和懸浮細胞,。按照其裂解液的強度可

以分為強、中,、弱三類,，具體特點和差異請參考附表2，可根據(jù)實驗需求選擇相應產品,。

經RIPA裂解液（中）提取的蛋白可應用于蛋白定量,、Western Blot、IP等檢測分析,。

　　RIPA裂解液（中）的主要成分為50mM Tris(pH 7.4),，150mM NaCl，1% NP-40,，

0.5% sodium deoxycholate,，0.1% SDS，以及sodium orthovanadate,，sodium fluoride,，

EDTA，leupeptin等多種抑制劑,，可以有效抑制蛋白降解,。

注意事項

1．為防止蛋白降解，所有的操作盡量在冰上進行,。

2．使用RIPA裂解液得到的蛋白樣品,，可采用BCA法進行蛋白定量，以測定蛋白濃度,。

   產品可單獨向本公司訂購,，如：K0014  BCA蛋白定量試劑盒。本品含有高濃度的

   去垢劑,，不能用Bradford法進行蛋白定量,。

3．建議在使用RIPA裂解液前，向溶液中加入蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑,，以防止蛋

   白降解,，或保持蛋白的磷酸化狀態(tài)。產品可單獨向本公司訂購,，如：K2200                                      蛋白酶抑制劑混合物,，K2383 磷酸酶抑制劑混合物。

4．若需獲得更高濃度的蛋白,，應減少哺乳動物蛋白抽提試劑的使用量,。

5．對于培養(yǎng)瓶中的貼壁細胞，推薦先使用常規(guī)方法消化細胞,，再參考懸浮細胞蛋白提

   取步驟操作,。

6．對于離心獲得的細胞，若不確定細胞體積,，可根據(jù)細胞數(shù)量計算RIPA裂解液的使用

   量,。如5×106個Hela細胞約需加入500 μl RIPA裂解液，以此類推,。

操作步驟

  I  細胞樣品

 · 貼壁細胞蛋白抽提

1．小心傾去貼壁細胞的培養(yǎng)液,。

2．可選步驟：若培養(yǎng)基中含有酚紅或其他可能影響實驗結果的物質，請先使用預冷的

   PBS漂洗細胞,。

3．加入適量RIPA裂解液（使用前2-3分鐘內加入蛋白酶抑制劑）,，試劑使用量請參考

   附表1，在冰上用槍頭吹打貼壁細胞,。

                     表 1   貼壁細胞     RIPA 裂解液使用量推薦表

細胞培養(yǎng)板類型或培養(yǎng)面積                         RIPA  裂解液使用量

                     100 mm*                         500-1,000 µl

                      60 mm                          250-500 µl

                    6 孔培養(yǎng)板                          200-400 µl /孔

                   24 孔培養(yǎng)板                          100-200 µl /孔

                   96 孔培養(yǎng)板                          50-100 µl /孔

 * 對于100 mm培養(yǎng)板培養(yǎng)的107個細胞 (50 mg)可裂解獲得約3 mg總蛋白（細胞類型不同略有差異）,。

4．將裂解液轉移至新的離心管中，冰上孵育20分鐘,，使細胞充分裂解,。

5．14,000×g離心10分鐘。轉移上清液至新管中,，進行下一步分析。

 · 懸浮細胞蛋白提取

1．懸浮細胞2,500×g,，離心5分鐘,，棄去上清。

2．可選步驟：若培養(yǎng)基中含有酚紅或其他可能影響實驗結果的物質，請使用PBS漂洗

   細胞,。漂洗后的細胞懸浮液2,500×g離心5分鐘,，棄去上清。

3．加入適量RIPA裂解液（使用前2-3分鐘內加入蛋白酶抑制劑）,，每5×106細胞加入約

   200-500 µl RIPA裂解液,，吹打均勻。

4．冰上放置20分鐘,，使細胞充分裂解,。

5．14,000×g離心10分鐘。轉移上清液至新管中,，進行下一步分析,。

  II  組織樣品

1．取適當?shù)腞IPA裂解液，在使用前2-3分鐘內加入蛋白酶抑制劑,。

2．稱量實驗組織的重量,，按照1：10（g/ml）的比例加入RIPA裂解液后將組織剪成細

   小碎片，用電動勻漿器勻漿處理,。若需要濃縮的蛋白提取物,，可適當減少組織蛋白

   抽提試劑使用量。

3．冰上孵育20分鐘,，使細胞充分裂解,。

4．14,000×g 離心10分鐘。轉移上清液至新管中,，進行下一步分析,。

   注：RIPA裂解液的裂解產物中可能會出現(xiàn)一小團透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象,。該透明膠狀物為基因組。

 表2 蛋白裂解液性能,、參數(shù)比較

目錄號    K2333                K2334           K2335             K2337

產品名稱   RIPA 裂解液（強） RIPA 裂解液（中）  RIPA 裂解液（弱）  SDS  裂解液

             1%Triton X-100,，    1% NP-40，        1% NP-40,，         1%SDS

               1% sodium       0.5% sodium      0.25% sodium

有效裂解成分

             deoxycholate,，    deoxycholate，     deoxycholate

               0.1% SDS         0.1% SDS

裂解強度          強                中               溫和               強

膜蛋白提取       很好               較好               一般             很好

胞漿蛋白提取      很好               很好               很好            很好

核蛋白提取        很好               較好               較好            很好

主要用途          WB,，IP            WB，IP       WB,，IP,，CO-IP       WB，CHIP

    相關產品信息

            目錄號                 產品名稱

            K2333              RIPA裂解液（強）

            K2334              RIPA裂解液（中）

            K2335              RIPA裂解液（弱）

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            K2337              SDS裂解液

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