產(chǎn)品介紹：
該產(chǎn)品是我司在Plasmid Transfection Reagent的基礎(chǔ)上進(jìn)一步研發(fā)成功的專門用于核酸高效轉(zhuǎn)染的試劑盒。它具有非常好的轉(zhuǎn)染性能,，可高效轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)貼壁細(xì)胞,，轉(zhuǎn)染效率可高達(dá)90%以上（Hela細(xì)胞，EGFP質(zhì)粒）,。其功能強(qiáng)大,，不僅可高效轉(zhuǎn)染較大分子的質(zhì)粒DNA，還可高效轉(zhuǎn)染mRNA,、siRNA,、mimics和各種小分子DNA,。

與目前市場(chǎng)上常見(jiàn)的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑不同，該試劑盒采用生物可降解材料配制,，對(duì)細(xì)胞的毒性很低,，轉(zhuǎn)染后24小時(shí)細(xì)胞幾乎無(wú)明顯死亡。它使用也非常方便,，先將轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)粒DNA混合,，再將轉(zhuǎn)染試劑-DNA復(fù)合物直接加入培養(yǎng)細(xì)胞中，血清不影響其轉(zhuǎn)染效果,，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液,，操作十分簡(jiǎn)便。它適合于貼壁細(xì)胞的核酸轉(zhuǎn)染,，如需轉(zhuǎn)染原代細(xì)胞,，請(qǐng)選擇原代細(xì)胞核酸轉(zhuǎn)染試劑盒（abs60324）。如需轉(zhuǎn)染懸浮細(xì)胞,，請(qǐng)選擇懸浮細(xì)胞核酸轉(zhuǎn)染試劑盒（abs60325）,。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1、強(qiáng)大的細(xì)胞轉(zhuǎn)染性能：可高效轉(zhuǎn)染多種貼壁細(xì)胞,，轉(zhuǎn)染效率在貼壁細(xì)胞中可高達(dá)90%以上,；
2、轉(zhuǎn)染功能強(qiáng)大,，不僅可高效轉(zhuǎn)染大分子質(zhì)粒DNA,，還可高效轉(zhuǎn)染mRNA、siRNA,、mimics和各種小分子DNA,；
3、極低的細(xì)胞毒性：使用可降解生物材料,，細(xì)胞毒性低,，轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率不到10%，大大降低了因細(xì)胞毒性對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響,；
4,、操作簡(jiǎn)便，可用于含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染,，轉(zhuǎn)染前后不需要更換培養(yǎng)液,。

試劑盒包裝：

轉(zhuǎn)染效率：可高效轉(zhuǎn)染多種貼壁細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效率在貼壁細(xì)胞中可高達(dá)90%以上,；
細(xì)胞死亡率：死亡率不到10%

操作步驟：

一,、質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染（以24孔板轉(zhuǎn)染為例）:

A、細(xì)胞接種:
1,、轉(zhuǎn)染前一天對(duì)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)接,，每孔接種0.8-1.2×105個(gè)細(xì)胞,，使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度為90%左右，且生長(zhǎng)良好（非常重要）,；
2,、最好在轉(zhuǎn)染開始之前更換新鮮的含血清培養(yǎng)基，以防轉(zhuǎn)染后孵育階段細(xì)胞密度太大,、營(yíng)養(yǎng)不足導(dǎo)致細(xì)胞死亡,。

B、試劑B /DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備(該步完成后應(yīng)立即進(jìn)行轉(zhuǎn)染):
1,、在1.5 ml無(wú)菌離心管中加入50 ul無(wú)血清培養(yǎng)基,，再加入適量的轉(zhuǎn)染試劑，見(jiàn)附表,。用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘,。
2、在1.5 ml無(wú)菌離心管中加入50 ul無(wú)血清培養(yǎng)基,，并加入適量的試劑A,，輕輕混勻，再加入適量的DNA,，見(jiàn)附表,。用移液器再次輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。
3,、 將DNA-培養(yǎng)基混合物滴加至試劑B-培養(yǎng)基混合物中,，用移液器輕輕混勻后在室溫靜置15-20分鐘后，立即轉(zhuǎn)染,。注意： 試劑B-培養(yǎng)基混合物和DNA-培養(yǎng)基混合物的混合次序非常重要，切勿顛倒,。
注意：離心管最好使用聚丙烯離心管,。

C、轉(zhuǎn)染:
1,、將步驟B制備的轉(zhuǎn)染復(fù)合物滴加至培養(yǎng)基中,，邊加邊輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)板以使復(fù)合物均勻分布。加完后,，立即將培養(yǎng)板轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng),。
2、培養(yǎng)12小時(shí)后即可觀察,，最佳觀察或收獲時(shí)間為24-48小時(shí),。
3、試劑B在培養(yǎng)基中仍有較高的轉(zhuǎn)染效率,，因此轉(zhuǎn)染前后不需要換成無(wú)血清或低血清培養(yǎng)基,。

二,、siRNA轉(zhuǎn)染（以24孔板轉(zhuǎn)染為例）:

A、 細(xì)胞接種:
1,、轉(zhuǎn)染前一天對(duì)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)接,，使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度為30-50%左右，且生長(zhǎng)良好,、無(wú)支原體污染（非常重要）,；
2、 最好在轉(zhuǎn)染開始之前更換新鮮的含血清培養(yǎng)基,，以防轉(zhuǎn)染后孵育階段細(xì)胞密度太大,、營(yíng)養(yǎng)不足導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

B,、試劑B /siRNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備 (該步完成后應(yīng)立即轉(zhuǎn)染):
1,、 在1.5 ml無(wú)菌離心管中加入50 ul無(wú)血清培養(yǎng)基，并添加適量的轉(zhuǎn)染試劑(見(jiàn)下表) ,。用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘,。
2、 在1.5 ml無(wú)菌離心管中加入50 ul無(wú)血清培養(yǎng)基,，并添加適量的siRNA（見(jiàn)下表）,，用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。
3,、將siRNA-培養(yǎng)基混合物滴加至試劑B-培養(yǎng)基混合物中,，用移液器輕輕混勻后在室溫靜置15-20分鐘后，立即轉(zhuǎn)染,。

C,、轉(zhuǎn)染:
1、將步驟B制備的轉(zhuǎn)染復(fù)合物滴加至培養(yǎng)基中,，邊加邊輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)板,。加完后，立即將培養(yǎng)板轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng),。
2,、37°C培養(yǎng)24-72小時(shí)，檢測(cè)基因抑制效果,。如果需要,，細(xì)胞培養(yǎng)4-6小時(shí)可以更換培養(yǎng)基，但不是必須,。
3,、 試劑B 在培養(yǎng)基中仍有較高的轉(zhuǎn)染效率，因此轉(zhuǎn)染前后不需要換成無(wú)血清或低血清培養(yǎng)基。

儲(chǔ)存/保存方法：

-20°C 保存,，使用前請(qǐng)輕輕混勻,；有效期1年。

技術(shù)指標(biāo)：

附表 1：質(zhì)粒轉(zhuǎn)染不同培養(yǎng)體系推薦初始轉(zhuǎn)染條件

附表 2：siRNA 轉(zhuǎn)染不同培養(yǎng)體系推薦初始轉(zhuǎn)染條件

產(chǎn)品用途：

可高效轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)貼壁細(xì)胞,，轉(zhuǎn)染效率可高達(dá)90%以上（Hela細(xì)胞，EGFP質(zhì)粒）,。試劑A功能強(qiáng)大,，不僅可高效轉(zhuǎn)染較大分子的質(zhì)粒DNA，還可高效轉(zhuǎn)染mRNA,、siRNA,、mimics和各種小分子DNA。

注意事項(xiàng)：

1,、剛開始轉(zhuǎn)染,，請(qǐng)務(wù)必進(jìn)行優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，如24孔板質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,，每孔質(zhì)粒用量0.8 ug,， 試劑B 可選擇2.0 ul、2.5 ul,、3.0 ul,、3.5 ul進(jìn)行優(yōu)化。24孔板siRNA轉(zhuǎn)染,，試劑B 用量2.0 ul,，siRNA用量可選10 pmol、20 pmol,、30 pmol,、40 pmol進(jìn)行優(yōu)化。
2,、 在制備DNA或siRNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)，應(yīng)避免體系中存在血清,，因血清會(huì)干擾試劑B 與DNA或siRNA形成復(fù)合物,。培養(yǎng)體系中盡量不要添加抗生素，抗生素會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)細(xì)胞死亡,。
3,、試劑A僅用于質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，RNA或siRNA轉(zhuǎn)染不需加入試劑A,。
4,、 請(qǐng)注意質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和siRNA轉(zhuǎn)染時(shí)對(duì)細(xì)胞密度和轉(zhuǎn)染試劑用量等條件的差異,，不要混用同一條件。
5,、如果需要質(zhì)粒穩(wěn)轉(zhuǎn),，請(qǐng)?jiān)谵D(zhuǎn)染24-48小時(shí)后加入篩選培養(yǎng)基。
6,、 本產(chǎn)品適合于質(zhì)粒DNA,、siRNA分別獨(dú)立轉(zhuǎn)染，如需質(zhì)粒DNA,、siRNA共轉(zhuǎn),，請(qǐng)選用核酸共轉(zhuǎn)染試劑盒。
本產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究,，不得用于醫(yī)學(xué)臨床用途,。

*溫馨提示：本產(chǎn)品僅作科研實(shí)驗(yàn)使用，不支持臨床等研究