科研狗起早摸黑做了幾天分子克隆實驗，

本想著拖了好幾個星期的實驗終于要做完啦,！瞬間覺得自己棒棒噠,！

但是最后看實驗結(jié)果！??！ 原地裂開

排查實驗試劑，沒問題,！

排查實驗操作,，沒問題！

排查儀器,，沒問題,！

那么問題到底出在哪呢？

其實問題有可能出現(xiàn)在樣本保存與前處理步驟中哦,。生物樣本中的核酸(DNA/RNA)會因為核酸酶,、溫度、pH值,、微生物,、自身化學(xué)性質(zhì)等因素而發(fā)生被動或主動降解，從而導(dǎo)致分子實驗結(jié)果不盡人意,。目前針對不同科研的需求,，更多的樣本保存方式也相繼問世，小愛為大家匯總了各類樣本保存的步驟,、注意事項,、以及樣本保存耗材或保存液的推薦。

一,、實驗樣本主要類型：

分子實驗中主要的樣本類型有：純核酸類,、組織類、細胞類及環(huán)境類,。不同樣本具有不同的保存方式以及操作注意事項,。

圖1 常見的實驗樣本類型

表1 不同類型樣本核酸保存方法及穩(wěn)定性

二、實驗樣本前處理步驟及注意事項

1,、組織樣本：

塊狀組織樣本短時間內(nèi)無法充分裂解,，一般需要進行樣本預(yù)處理。組織取材在組織離體30min內(nèi)完成,，取樣的動作要盡量快速利索,，將組織按任一方向切成黃豆粒大小。

組織DNA提?。?/strong>新鮮組織樣本用生理鹽水清洗2次,，即刻進行實驗,。如若不立即進行實驗,，可用液氮速凍，-80℃凍存,。

組織RNA提?。?/strong>將動物或植物組織切成小塊,，在液氮中磨碎或用勻漿器勻漿處理,快速轉(zhuǎn)入裝有1mL Trizol(abs60154)的2mL離心管中，立即進行實驗,。若后期再進行實驗,，盡量保存時將樣本浸入RNA樣品保存液(abs9268)后置4℃冰箱過夜（4℃過夜是必需的，這樣可使RNA樣品保存液滲入到組織中）,，然后轉(zhuǎn)移到-20℃冰箱,。或者液氮研磨組織,，加入Trizol,，放入-80℃保存。

圖2 組織樣本RNA提取流程圖

2,、細胞樣本：

DNA提?。?/strong>細胞收集沉淀后，進行液氮速凍,，-80℃保存,。

RNA提取：

1）貼壁細胞：吸盡培養(yǎng)液,，每10cm²培養(yǎng)面積加入1mL Trizol,，用加樣器吹打數(shù)次，以確保細胞裂解,，然后轉(zhuǎn)移至離心管中,。注：貼壁細胞Trizol的使用量應(yīng)由培養(yǎng)皿表面積決定，而非由細胞數(shù)目決定,。Trizol量不足可能導(dǎo)致提取的RNA中有DNA污染,；
2）懸浮細胞：離心收集細胞，吸盡液體,，每5-10×10⁶動植物或酵母細胞,，或每1×10⁷細菌細胞加入1mL Trizol，用加樣器吹打,，使其裂解,，然后轉(zhuǎn)移至離心管中。 注：添加Trizol前切勿洗滌細胞,，以免RNA降解,。必要時可以用勻漿器來裂解某些細菌或者酵母細胞。若后期再進行RNA提取實驗,，細胞用液氮速凍,，-80℃凍存。

3、血液樣本：

采用含有抗凝劑的真空采血管保存即可,。但采血管中的抗凝劑種類多樣,，抗凝劑的種類也會直接影響后續(xù)檢測結(jié)果，面對這么多的采血管如何進行選擇,？我們建議使用EDTA或枸櫞酸鈉抗凝管,，不建議使用肝素抗凝管（因肝素在后面的核酸提取過程中很難去除，且肝素對PCR反應(yīng)有很強的抑制作用,，因此不建議使用肝素抗凝管）,。采集完血液，顛倒混勻備用,。另外冰凍血液溶解過程中會有破碎的細胞釋放RNA酶,，因此在冰凍前加入Trizol，切勿直接凍存新鮮血液,，保存好的血液應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

4、血清/血漿樣本：

全血不加抗凝劑分離的上清是血清,，加入抗凝劑分離的上清是血漿,。取全血后，靜止1-2h,，置于離心機3000rpm離心15min即可獲得血清或血漿,。

三、樣本前處理利器—RNA樣品保存液(abs9268)

RNA樣品保存液是一種無毒的可直接使用的樣品儲存液,，能使細胞內(nèi)的RNA與RNA酶分離,，防止樣本中RNA表達譜發(fā)生變化。加入樣本保存液的樣本中RNA在室溫可以保存7天,，4℃可以保存4周,，-20℃、-80℃標(biāo)本可以長期保存,。在RNA樣品保存液中保存的標(biāo)本,，反復(fù)凍融至室溫20次不影響RNA的質(zhì)量。

操作步驟：

1）計算保存液用量：根據(jù)要保存的各樣本的體積,，計算出所需RNA樣品保存液用量,；a：RNA樣品保存液的用量應(yīng)當(dāng)是組織體積的10倍(100mg組織約用1mL RNA樣品保存液)；b：離心收集2×10⁷細胞RNA樣品保存液的用量是1mL,；
2）分裝：將RNA樣品保存液按需要量分裝入自備保存管中,；
3）切片：快速將較大的組織切成厚度＜0.5cm的任意片狀，較小的組織直接取下,，立即浸入RNA樣品保存液中,；
4）保存：保存時先將樣本浸入RNA樣品保存液后置4℃冰箱過夜，然后轉(zhuǎn)移到-20℃冰箱或繼續(xù)轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱。

四,、本期小愛產(chǎn)品推薦

Absin特色產(chǎn)品線：

WB相關(guān)：ECL發(fā)光液、預(yù)染marker,、預(yù)制膠,；IHC相關(guān)：二抗試劑盒、組化筆,；IP/CoIP試劑盒,；激動劑/抑制劑；血清,、BSA,、蛋白酶K、CTB,、TTX,、CEE；凋亡試劑盒,；呼吸爆發(fā)試劑盒,；ELISA試劑盒；重組蛋白,；抗體: 二抗,、標(biāo)簽抗體、對照抗體,；定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測)...