產品介紹：
這款產品是在DeofectEU Transfection Reagent的基礎上進一步優(yōu)化研發(fā)成功的專門用于質粒DNA細胞轉染的轉染試劑,。它具有非常好的轉染性能，可高效轉染多種貼壁細胞,、原代細胞和懸浮細胞,，轉染效率在貼壁細胞中高達90%以上（EGFP質粒）。與目前市場上常見的脂質體轉染試劑不同,，它采用生物可降解材料配制,，對細胞的毒性很低,，轉染后細胞死亡率不到10%。這款產品使用也非常方便,，先將轉染試劑與質粒DNA混合,，再將轉染試劑-DNA復合物直接加入培養(yǎng)細胞中，血清不影響其轉染效果,，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液,，操作十分簡便。

產品特點：
1,、強大的細胞轉染性能：可高效轉染多種貼壁細胞,、原代細胞和懸浮細胞，轉染效率在貼壁細胞中高達90%以上,；
2,、極低的細胞毒性：使用可降解生物材料，細胞毒性低,，轉染細胞死亡率不到10%,，大大降低了因細胞毒性對實驗結果的影響，實驗結果更為客觀,；
3,、操作簡便，可用于含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞的轉染,，轉染前后不需要更換培養(yǎng)液,。

方法步驟（以24孔板轉染為例）:

A、細胞接種:
1,、轉染前24小時左右對細胞進行轉接,，培養(yǎng)過夜。
2,、確保轉染時細胞密度為90%左右,。
3、最好在轉染開始之前更換新鮮的含血清培養(yǎng)基,，以防轉染后孵育階段細胞密度太大,、營養(yǎng)不足導致細胞死亡。

B,、R /DNA轉染復合物制備(該步完成后應立即進行轉染):
1、在1.5ml無菌離心管中加入50ul Trans buffer,，再加入適量的轉染試劑,，見附表。用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘,。
2,、在1.5ml無菌離心管中加入50ul Trans buffer,，再加入適量的DNA，見附表,。用移液器再次輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘,。
3、將DNA-Trans buffer混合物滴加至R-Trans buffer混合物中,，用移液器輕輕混勻后在室溫靜置15-20分鐘后,，立即轉染。

注意： R-Trans buffer混合物和DNA-Trans buffer混合物的混合順序非常重要,，切勿顛倒,。注意：離心管最好使用聚丙烯離心管。

C,、轉染:
1,、將步驟B制備的轉染復合物滴加至培養(yǎng)基中，邊加邊輕輕晃動培養(yǎng)板以使復合物均勻分布,。加完后,，立即將培養(yǎng)板轉入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。
2,、培養(yǎng)12小時后即可觀察,，最佳觀察或收獲時間為24-48小時。
3,、R在培養(yǎng)基中仍有較高的轉染效率,，因此轉染前后不需要換成無血清或低血清培養(yǎng)基。如果轉染后需要更換新鮮培養(yǎng)基,，請于加入R/DNA復合物12-24小時后進行,。

儲存/保存方法：

-20℃避光保存，Trans buffer 可保存于2-8°C,，有效期1年,，使用前輕輕混勻。

技術指標：

附表：不同培養(yǎng)體系推薦初始轉染條件

產品用途：

適用細胞系：293T，A549,，B16F10,，HEK 293，HeLa,，Hepa 1-6,，Hepa 1cLc7，HepG2,，BHK-21,，BNL.CL2,，BRL-3A，C2C12,，C6,，CHO-K1，Clone 9,，COS-1,，COS-7，Daoy,，DBTRG-05MG,，DI-TNC1，DU 145,，HLF-a,，Huh-7，K562,，KB,，KLN 205，Lυ2 (LLC1),，NCaP-FGC,，MCF-7，MEL,，Neuro-2a,，NIH3T3，OVCAR3,， PC3,，PC-12等。

注意事項：

1,、轉染前的細胞匯合度以90%左右為宜,，轉染時細胞生長狀態(tài)應保持良好，不要有支原體污染,。

2,、剛開始轉染，建議進行優(yōu)化實驗,，如24孔培養(yǎng)板,，每孔質粒用量 0.8ug，轉染試劑用量可選擇2.0ul,、2.5ul,、3.0ul、3.5ul進行優(yōu)化。

3,、應避免轉染復合物制備體系中存在血清，因血清會干擾R與 DNA形成復合物,，培養(yǎng)基中盡量不要使用抗生素,。

4、如果需要穩(wěn)轉,，請在轉染24-48小時后加入篩選培養(yǎng)基,。

5、本試劑盒主要用于質粒DNA轉染,，如需質粒DNA,、RNA、siRNA均可轉染的試劑,，請選擇核酸轉染試劑盒（#abs60259）,。