產(chǎn)品介紹：

    PM原代細(xì)胞核酸轉(zhuǎn)染試劑盒是專門用于核酸原代細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染的試劑盒。它具有非常好的轉(zhuǎn)染性能,，可高效轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)原代細(xì)胞,，轉(zhuǎn)染效率可高達(dá) 85%以上（EGFP 質(zhì)粒）。其功能強大,，不僅可高效轉(zhuǎn)染較大分子的質(zhì)粒 DNA,，還可高效轉(zhuǎn)染 mRNA、siRNA,、mimics 和各種小分子 DNA,。與目前市場上常見的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑不同，它采用生物可降解材料配制,，對細(xì)胞的毒性很低,，轉(zhuǎn)染后 24 小時細(xì)胞幾乎無明顯死亡。使用也非常方便,，先將轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)粒 DNA 混合,，再將轉(zhuǎn)染試劑-DNA 復(fù)合物直接加入培養(yǎng)細(xì)胞中，血清不影響其轉(zhuǎn)染效果,，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液,，操作十分簡便。 

產(chǎn)品特點：

1,、強大的細(xì)胞轉(zhuǎn)染性能：可高效轉(zhuǎn)染多種原代細(xì)胞,，轉(zhuǎn)染效率在原代細(xì)胞中可高達(dá)85%以上；

2,、轉(zhuǎn)染功能強大,，不僅可高效轉(zhuǎn)染大分子質(zhì)粒DNA，還可高效轉(zhuǎn)染mRNA,、siRNA,、mimics和各種小分子DNA；

3,、極低的細(xì)胞毒性：使用可降解生物材料,，細(xì)胞毒性低，轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率不到10%,，大大降低了因細(xì)胞毒性對實驗結(jié)果的影響,；

4、操作簡便,，可用于含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染,，轉(zhuǎn)染前后不需要更換培養(yǎng)液。

操作步驟：

一,、質(zhì)粒DNA 轉(zhuǎn)染（以24 孔板轉(zhuǎn)染為例）:

A,、細(xì)胞接種:

1、 轉(zhuǎn)染前一天對細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)接,，每孔接種0.8-1.2×10 5 個細(xì)胞,，使轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度為90%左右，且生長良好（非常重要）,；

2,、 最好在轉(zhuǎn)染開始之前更換新鮮的含血清培養(yǎng)基，以防轉(zhuǎn)染后孵育階段細(xì)胞密度太大,、營養(yǎng)不足導(dǎo)致細(xì)胞死亡,。

B、PM /DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備(該步完成后應(yīng)立即進(jìn)行轉(zhuǎn)染):

1,、在1.5 ml無菌離心管中加入50 ul無血清培養(yǎng)基,，再加入適量的PM轉(zhuǎn)染試劑，見附表,。用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘,。

2、 在1.5 ml無菌離心管中加入50 ul無血清培養(yǎng)基,，并加入適量的溶液A,，輕輕混勻，再加入適量的DNA,，見附表,。用移液器再次輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。

3,、將DNA-培養(yǎng)基混合物滴加至PM-培養(yǎng)基混合物中,，用移液器輕輕混勻后在室溫靜置15-20分鐘后，立即轉(zhuǎn)染,。注意： PM-培養(yǎng)基混合物和DNA-培養(yǎng)基混合物的混合次序非常重要,，切勿顛倒。

注意：離心管最好使用聚丙烯離心管,。

C,、轉(zhuǎn)染:

1、 將步驟B制備的轉(zhuǎn)染復(fù)合物滴加至培養(yǎng)基中,，邊加邊輕輕晃動培養(yǎng)板以使復(fù)合物均勻分布,。加完后，立即將培養(yǎng)板轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng),。

2.,、培養(yǎng)12小時后即可觀察,，最佳觀察或收獲時間為24-48小時。

3,、PM在培養(yǎng)基中仍有較高的轉(zhuǎn)染效率,，因此轉(zhuǎn)染前后不需要換成無血清或低血清培養(yǎng)基。

二,、siRNA 轉(zhuǎn)染（以24 孔板轉(zhuǎn)染為例）:

A,、 細(xì)胞接種:

1、轉(zhuǎn)染前一天對細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)接,，使轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度為30-50%左右,，且生長良好、無支原體污染（非常重要）,；

2.,、最好在轉(zhuǎn)染開始之前更換新鮮的含血清培養(yǎng)基，以防轉(zhuǎn)染后孵育階段細(xì)胞密度太大,、營養(yǎng)不足導(dǎo)致細(xì)胞死亡,。

B、PM /siRNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備 (該步完成后應(yīng)立即轉(zhuǎn)染):

1,、 在1.5 ml無菌離心管中加入50 ul無血清培養(yǎng)基,，并添加適量的PM轉(zhuǎn)染試劑(見下表) 。用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘,。

2,、在1.5 ml無菌離心管中加入50 ul無血清培養(yǎng)基，并添加適量的siRNA（見下表）,，用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘,。

3、將siRNA-培養(yǎng)基混合物滴加至 PM-培養(yǎng)基混合物中,，用移液器輕輕混勻后在室溫靜置15-20分鐘后,，立即轉(zhuǎn)染。

C,、轉(zhuǎn)染:

1,、將步驟B制備的轉(zhuǎn)染復(fù)合物滴加至培養(yǎng)基中，邊加邊輕輕晃動培養(yǎng)板,。加完后,，立即將培養(yǎng)板轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

2,、37°C培養(yǎng)24-72小時,，檢測基因抑制效果。如果需要,，細(xì)胞培養(yǎng)4-6小時可以更換培養(yǎng)基,，但不是必須,。

3、 PM 在培養(yǎng)基中仍有較高的轉(zhuǎn)染效率,，因此轉(zhuǎn)染前后不需要換成無血清或低血清培養(yǎng)基,。

注意事項：

1、 剛開始轉(zhuǎn)染,，請務(wù)必進(jìn)行優(yōu)化實驗，如24孔板質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,，每孔質(zhì)粒用量0.8 ug,， PM可選擇2.0 ul、2.5 ul,、3.0 ul,、3.5 ul進(jìn)行優(yōu)化。24孔板siRNA轉(zhuǎn)染,，PM 用量2.0 ul,，siRNA用量可選10 pmol、20 pmol,、30 pmol,、40 pmol進(jìn)行優(yōu)化。

2,、進(jìn)行質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,，接種細(xì)胞的數(shù)量應(yīng)以確保轉(zhuǎn)染時的細(xì)胞匯合度在80-90%為準(zhǔn)，過高或過低均會影響轉(zhuǎn)染效率,。進(jìn)行siRNA轉(zhuǎn)染,，接種細(xì)胞的數(shù)量應(yīng)以確保轉(zhuǎn)染時的細(xì)胞匯合度在30-50%為準(zhǔn)。在制備DNA或siRNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物時,，應(yīng)避免體系中存在血清（推薦DMEM）,。培養(yǎng)體系中盡量不要添加抗生素，抗生素會導(dǎo)致培養(yǎng)細(xì)胞死亡,。

3,、溶液A僅用于質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，RNA或siRNA轉(zhuǎn)染不需加入溶液A,。

4,、 請注意質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和siRNA轉(zhuǎn)染時對細(xì)胞密度和轉(zhuǎn)染試劑用量等條件的差異，不要混用同一條件,。

5,、 如果需要質(zhì)粒穩(wěn)轉(zhuǎn)，請在轉(zhuǎn)染24-48小時后加入篩選培養(yǎng)基,。

6,、 本產(chǎn)品適合于質(zhì)粒DNA,、siRNA分別獨立轉(zhuǎn)染，如需質(zhì)粒DNA,、siRNA共轉(zhuǎn),，請選用核酸共轉(zhuǎn)染試劑（abs60317）。

附表 1： 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染不同培養(yǎng)體系推薦初始轉(zhuǎn)染條件

附表 2：siRNA 轉(zhuǎn)染不同培養(yǎng)體系推薦初始轉(zhuǎn)染條件

儲存/保存方法：

-20°C 避光保存,，有效期一年，使用前請輕輕混勻,。

試劑盒組成：

產(chǎn)品用途：

適用細(xì)胞系 ：小鼠軟骨細(xì)胞,，大鼠軟骨細(xì)胞，人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞,，人肺靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,，人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，小鼠肺成纖維細(xì)胞,，人肺癌上皮細(xì)胞,，人乳腺癌上皮細(xì)胞，人結(jié)腸癌細(xì)胞,，人氣管上皮細(xì)胞,， 人肝癌細(xì)胞，人宮頸癌上皮細(xì)胞,，前列腺癌上皮細(xì)胞,，大鼠肺靜脈平滑肌細(xì)胞，人肺動脈平滑肌細(xì)胞,，大鼠心肌細(xì)胞,，人纖維肉瘤細(xì)胞，大鼠骨骼肌細(xì)胞,，人橫紋肌肉瘤細(xì)胞,，人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞， 人黑色素瘤細(xì)胞,，人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞,，小鼠肝癌細(xì)胞，小鼠胚胎成纖維細(xì)胞等等