GP293 (人胚腎細胞)

二、細胞培養(yǎng)操作

1) 復蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主,。

將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度,。

2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。

a,、棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。

b,、加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。  

c、按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

d、將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例,；

a,、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中,，1000 rpm條件下離心4 min,，棄去上清液，用PBS清洗一遍,，棄盡PBS,，進行細胞計數(shù)。

b,、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液,，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻,，每支凍存管凍存1mL細胞懸液,，注意凍存管做好標識。

c,、將凍存管放入-80℃冰箱,，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

三,、培養(yǎng)注意事項 

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系,。 

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息,，如細胞形態(tài),、所用培養(yǎng)基、血清比例,、所需 細胞因子等,，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題,，責任由 客戶自行承擔,。 

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面,，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后,，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h,。 

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞,，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞,，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,，，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細胞,，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。 

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng),。 

6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片,，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通 交流,。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系,，告知細胞 的具體情況,，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決,。 

7. 該細胞僅供科研使用。 

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細胞,，請換用按照說明書細胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。     收到細胞后次傳代建議 1：2 傳代 。 

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿,。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿,。

僅用于科研，不能用于臨床診斷,！所有產品僅供科研使用,，不得用于人或動物的治療等任何其他用途，不為任何個人提供產品和服務,。以實際收貨產品說明書為準,，網(wǎng)站說明書僅供參考。