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創(chuàng)造了Tiselius電泳儀,，建立了研究蛋白質(zhì)的移動(dòng)界面電泳方法,，并證明了血清是由白蛋白及α、β,、γ球蛋白組成的。
電泳是指帶電顆粒在電場(chǎng)的作用下發(fā)生遷移的過(guò)程。許多重要的生物分子,，如氨基酸,、多肽、蛋白質(zhì),、核苷酸,、核酸等都具有可電離基團(tuán)，它們?cè)谀硞€(gè)特定的pH值下可以帶正電或負(fù)電,，在電場(chǎng)的作用下,，這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷極性相反的電極方向移動(dòng)。電泳技術(shù)就是利用在電場(chǎng)的作用下,，由于待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大小,、形狀等性質(zhì)的差異，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度,，從而對(duì)樣品進(jìn)行分離,、鑒定或提純的技術(shù)。
1.瓊脂糖凝膠電泳原理:瓊脂糖凝膠具絡(luò),物質(zhì)分子通過(guò)時(shí)到阻力,，大分子物質(zhì)在涌動(dòng)時(shí)受到的阻力大,，因此在凝膠電泳中，帶電顆粒的分離不僅取決于凈電荷的性質(zhì)和數(shù)量,，而且還取決于分子大小,，這就大大提高了分辨能力。但由于其孔徑相比于蛋白質(zhì)太大,，對(duì)大多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)其分子篩效應(yīng)微不足道,，現(xiàn)廣泛應(yīng)用于核酸的研究中。瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂糖作支持介質(zhì)的一種電泳方法,。其分析原理與其他支持物電泳最主要區(qū)別是:心兼有“分子篩”和“電泳”的雙重作用,。
2.瓊脂糖凝膠電泳用途:用于DNA切膠回收,；用于DNA分離；用于佐證DNA是否重組,、質(zhì)粒是否切開(kāi)以及其他分子生物學(xué)研究
3.瓊脂糖凝膠電泳特點(diǎn)：
I,、優(yōu)點(diǎn)：
因不含硫酸根和羧基，幾乎消除了瓊脂的電滲
對(duì)蛋白質(zhì)吸附極微,，故無(wú)拖尾現(xiàn)象,。
凝膠結(jié)構(gòu)均勻，孔徑較大,，可用來(lái)分離酶的復(fù)合物,、核酸、病毒等大分子物質(zhì),。
透明度較好,，可直接或干燥成薄膜后進(jìn)行染色。
不吸收紫外光,，可直接利用紫外光吸收法作定量測(cè)定
有熱可逆性
II,、缺點(diǎn)：
機(jī)械強(qiáng)度差，易破碎,，濃度不能太低,。
易被細(xì)菌污染，不易保存,，臨用前配制,。
瓊脂糖支持層上的區(qū)帶易于擴(kuò)散，電泳后必須立即固定染色,。
與PAGE相比,，分子篩作用小，區(qū)帶少,。
1.制備1%瓊脂糖凝膠(大膠用70ml,小膠用50ml):稱(chēng)取0.7 g(0.5 g)瓊脂糖置于錐形瓶中,加入70 ml(50ml)1×TAE,瓶口倒扣小燒杯.微波爐加熱煮沸3次至瓊脂糖全部融化,搖勻,，即成1.0%瓊脂糖凝膠液.
取電泳槽內(nèi)的有機(jī)玻璃內(nèi)槽(制膠槽)洗干凈,晾干,放入制膠玻璃板.取透明膠帶將玻璃板與內(nèi)槽兩端邊緣封好,形成模子.將內(nèi)槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子.將冷卻到65℃左右的瓊脂糖凝膠液混勻小心地倒入內(nèi)槽玻璃板上,使膠液緩慢展開(kāi),，直到整個(gè)玻璃板表面形成均勻膠層.室溫下靜置直至凝膠*疑固,垂直輕拔梳子,取下膠帶,將凝膠及內(nèi)槽放入電泳槽中.添加
在點(diǎn)樣板或pa rafi lm上混合DNA樣品和上樣緩沖液,上樣緩沖液的最終稀釋倍數(shù)應(yīng)不小于1X.用10ul微量移液器分別將樣品加入膠板的樣品小槽內(nèi),每加完一個(gè)樣品,應(yīng)更換一個(gè)加樣頭,以防污染,加樣時(shí)勿碰壞樣品孔周?chē)哪z面.(注意:加樣前要先記下加樣的順序).
加樣后的凝膠板立即通電進(jìn)行電泳,電壓60-100V,樣品由負(fù)極(黑色)向正極(紅色)方向移動(dòng).電壓升高,瓊脂糖凝膠的有效分離范圍降低.當(dāng)溴酚藍(lán)移動(dòng)到距離膠板下沿約1cm處時(shí),停止電泳.
DNA分子的大小
凝膠的濃度
DNA的構(gòu)象
使用的電壓
瓊脂糖的種類(lèi)
電泳緩沖液
嵌入染料的存在
以上這些因素都會(huì)對(duì)電泳產(chǎn)生影響,，具體詳細(xì)內(nèi)容就不在這里給大家一一介紹了，以后大家遇到什么問(wèn)題的話(huà),，都可以從這幾方面入手去找問(wèn)題
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