即使蛋白酶對細(xì)胞功能很重要,，但你也有不想見到它們的時候。比如,，在純化蛋白質(zhì)的時候，你可不想讓蛋白酶大肆吞噬你的目標(biāo)蛋白吧,，特別是低豐度蛋白,。如今，市場上有多種蛋白酶抑制劑可供選擇,，幫助你在必要時停止蛋白酶的活性,。
為了對付細(xì)胞和組織樣品中存在的各種蛋白酶，抑制劑的選擇也在不斷增加,。目前,，主要有四種類型的蛋白酶，根據(jù)他們活性位點(diǎn)中的氨基酸命名：絲氨酸蛋白酶,、半胱氨酸蛋白酶,、天冬氨酸蛋白酶和金屬蛋白酶。蛋白酶抑制劑可以特異針對一種蛋白酶,，也可以是廣譜的,。
人們通常根據(jù)抑制劑作用的蛋白酶類型，以及它們可逆或不可逆,，對蛋白酶抑制劑進(jìn)行分類,。如何選擇和使用,？這似乎是一個難題，光看名字就已經(jīng)讓人頭暈了,。下面讓我們來聽聽專業(yè)人士的建議,。
從雞尾酒開始
蛋白酶抑制劑的選擇，取決于每個用戶的個性化實(shí)驗(yàn),，不過對于裂解細(xì)胞或勻漿組織的應(yīng)用,，抑制劑混合物（或者說雞尾酒）通常是個比較保險的選擇，可阻斷不同的蛋白酶,。Abbexa暢銷的抑制劑就是兩種混合物：Protease Inhibitor Cocktail Multipurpose以及Protease, Phosphatase & PMSF,；這兩者都適用于裂解液?！八鼈兤毡檫m用,，適合許多樣品，無論是新鮮還是FFPE組織,，抑或不同的物種,，”Abbexa的經(jīng)理Sabrina Calabressi談道。
若研究人員希望保留目的蛋白,，同時維持細(xì)胞健康,，默克密理博的高級經(jīng)理Chandra Mohan也建議使用抑制劑混合物。她建議選擇針對四種蛋白酶的抑制劑,，如默克密理博的Protease Inhibitor Cocktail III,。它可抑制哺乳動物細(xì)胞和組織中的天冬氨酸、半胱氨酸和絲氨酸蛋白酶以及氨肽酶,。
有時,，不那么特異的抑制劑似乎是個更好的選擇?！霸诹呀饧?xì)胞或制備組織勻漿液時,，最好使用具有廣譜特異性的抑制劑，”Mohan說,?！八鼈儜?yīng)當(dāng)快速反應(yīng)，與蛋白酶不可逆結(jié)合,，并在蛋白純化后輕松去除,。”
盡管如此,，選擇困難癥還是圍繞著你,。Abbexa認(rèn)為，嘗試不同的類型是供應(yīng)商的責(zé)任，而不是研究人員的,。這家公司建議你和供應(yīng)商交流,，讓他們將利用自己的專業(yè)知識來幫你選擇。通常,，Abbexa在了解研究人員的特定分析,、樣品類型和應(yīng)用之后，才推薦最佳的抑制劑,。
考慮作用機(jī)制
對于某些類型的實(shí)驗(yàn),，你也許要在更小的范圍內(nèi)搜索抑制劑。根據(jù)Mohan的建議,，你需要先確定阻斷的是哪種類型的蛋白酶,，然后再選擇合適的抑制劑。因?yàn)椴煌囊种苿┯胁煌淖饔脵C(jī)制,。
“蛋白酶抑制劑可能是可逆的,，也可能是不可逆的，它們通過空間位阻來防止底物靠近活性位點(diǎn),，”Mohan說,。其他蛋白酶抑制劑抑制劑可能通過修飾蛋白酶活性位點(diǎn)的氨基酸來發(fā)揮作用?！氨热?，PMSF可讓絲氨酸蛋白酶失活，它與活性絲氨酸發(fā)生反應(yīng),，其中氯＋基酮衍生物與活性位點(diǎn)中的催化三聯(lián)體反應(yīng),，”Mohan談道。
先廣泛,，后具體
如今,，抑制劑用在各種各樣的應(yīng)用中，這也是人們需要謹(jǐn)慎選擇的一個原因,。“下游的處理和分析,，將決定蛋白酶抑制劑的選擇和使用,，”Sigma-Aldrich的市場部經(jīng)理Robert Gates談道。例如,，他補(bǔ)充說,，“液相蛋白質(zhì)組分析（如血清）可能需要蛋白酶的立即抑制，因?yàn)樗鼈儠獾拓S度的目標(biāo)蛋白,?！?br style="box-sizing: border-box;"/>事實(shí)上，目前有這么多類型的抑制劑，將它們分門別類還真是很困難,。在選擇蛋白酶抑制劑時,，Gates建議從廣泛的開始，然后不斷縮小范圍,?！暗谝徊娇赡苁菄L試預(yù)先配置的雞尾酒，比如Sigma-Aldrich的P8340,，專為哺乳動物的組織而設(shè)計的,，”他說?！叭绻鞍姿馊匀淮嬖?，可以采取針對特定組織和蛋白的方法?！?br style="box-sizing: border-box;"/>我們是否能使用更少的抑制劑來抑制更多的蛋白酶,，這還有待觀察。不過,，在這么多的選擇中,，你肯定能找到一種有效的蛋白酶抑制劑，這是毫無疑問的,。
來源：生物通