TU 686（人喉癌細胞）

二、細胞培養(yǎng)操作

1) 復蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主,。

將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000 rpm條件下離心3 min,，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10 cm皿中,，加入約8 mL培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度,。

2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。

a,、棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。          

b,、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞,，棄去消化液,，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。          

c,、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中,，1000 rpm離心4 min,，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻,。

d,、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例,；

a,、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中,，1000 rpm條件下離心4 min,，棄去上清液，用PBS清洗一遍,，棄盡PBS,，進行細胞計數(shù)。

b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液,，使細胞密度5×106~1×107/mL,，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液,，注意凍存管做好標識,。

c、將凍存管放入-80℃冰箱,，24 h后轉入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。

三,、培養(yǎng)注意事項 

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系,。 

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息,，如細胞形態(tài),、所用培養(yǎng)基、血清比例,、所需 細胞因子等,，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題,，責任由 客戶自行承擔,。 

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。因運輸問題,，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象,。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h,。 

4. 貼壁細胞可以消化,，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞,，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,，，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng),。 

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。 

6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片,，記錄細胞狀態(tài),，便于和我司技術部溝通 交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞 的具體情況,，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決,。 

7. 該細胞僅供科研使用。 

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細胞,，請換用按照說明書細胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。     收到細胞后次傳代建議 1：2 傳代 。 

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿,。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿,。

僅用于科研，不能用于臨床診斷,！所有產品僅供科研使用,，不得用于人或動物的治療等任何其他用途，不為任何個人提供產品和服務,。以實際收貨產品說明書為準,，網站說明書僅供參考。