C28/I8 (人正常軟骨細(xì)胞)

二,、細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液,，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過(guò)夜）,。第三天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

a,、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。          

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞,，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 -3min（視細(xì)胞消化情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化,。輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中,，1000 rpm離心5 min，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻,。          

c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為例,；

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液,，裝入無(wú)菌離心管中,，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液,，用PBS清洗一遍,，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),。

b,、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL,，輕輕混勻,，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

c,、將凍存管放入-80℃冰箱,，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 

三,、培養(yǎng)注意事項(xiàng) 

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象,，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū),，了解細(xì)胞相關(guān)信息,，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基,、血清比例,、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致,，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題,，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。 

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h,。 

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞,，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞,，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,，，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞,，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。 

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng),。 

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和我司技術(shù)部溝通 交流,。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,，告知細(xì)胞 的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用,。 

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。     收到細(xì)胞后次傳代建議 1：2 傳代 ,。 

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) T25 瓶或者 2 個(gè) 6cm 皿,。不是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè)10cm 皿。

僅用于科研,，不能用于臨床診斷,！所有產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于人或動(dòng)物的治療等任何其他用途,，不為任何個(gè)人提供產(chǎn)品和服務(wù),。以實(shí)際收貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)，網(wǎng)站說(shuō)明書(shū)僅供參考,。