SW1463-LUC (人直腸腺癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記)

細(xì)胞篩選：

該細(xì)胞為已經(jīng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染LUC的細(xì)胞,，隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加,，其LUC熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度,，可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選,。

細(xì)胞經(jīng)過20μg/ml嘌呤霉素篩選，平時培養(yǎng)可維持10μg/ml嘌呤霉素

二,、細(xì)胞接收后的處理

1)收到細(xì)胞后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于室溫放置約1h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細(xì)胞有污染,，請拍照后及時聯(lián)系我們,。

2)請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3)貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在室溫中放置1h,，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況,，有些貼壁細(xì)胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,，若因運輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收,。

4)細(xì)胞運輸途中脫落操作方法：把脫落的細(xì)胞收集離心后棄上清，用PBS清洗一遍,，離心棄上清,，在離心管中加入1ml胰酶吹散消化20秒左右，加培養(yǎng)基終止消化后離心重新鋪平,，剩下的貼壁細(xì)胞就按照正常貼壁細(xì)胞傳代方法操作,。

5)備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,。  收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 ,。

三、細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,，棄去上清液,，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中,，加入約4 mL培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第三天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a)棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。          

b)加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，使消化液浸潤所有細(xì)胞,，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 -3min（視細(xì)胞消化情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化,。

c)輕輕打勻后裝入無菌離心管中,，1000 rpm離心5 min，棄去上清液,，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻,。          

d)將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

貼壁細(xì)胞傳代注意點：

一定要PBS洗一遍,。

細(xì)胞多觀察幾次掌握時間，不要在細(xì)胞沒有基本脫落就終止消化然后吹打下來,，這樣細(xì)胞  更容易分化和死亡,。

不要一直對細(xì)胞吹打

3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為例,；

a)收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中,，1000 rpm條件下離心4 min,，棄去上清液，用PBS清洗一遍,，棄盡PBS,，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。

b)根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液,，使細(xì)胞密度1×10^6~1×10^7/mL,，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,，注意凍存管做好標(biāo)識,。

c)將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

四、培養(yǎng)注意事項

1) 細(xì)胞出現(xiàn)問題,，予以重發(fā)情況

a)細(xì)胞運輸途中遭遇的各種問題,，細(xì)胞丟失,、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,，重發(fā),；

b)細(xì)胞污染問題，請在收到產(chǎn)品3 天內(nèi),，給我們提出真實的實驗結(jié)果,，核實后重發(fā)；

c)常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置2小時后,，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后2 天后,，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，（需提供真實清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片）,，重發(fā),；

d)干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后2天后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置2 小時候并且未開封，出現(xiàn)污染,，重發(fā),；

e)細(xì)胞活性問題，請在收到產(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果,，用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,，和每天的細(xì)胞照片，核實后予重發(fā),；

f)細(xì)胞收到當(dāng)天以及第2,3 天請拍照,，3 天未告知的，視為產(chǎn)品合格,。4-7 天內(nèi)出現(xiàn)問題需提供收到細(xì)胞前3天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問題的照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟,，并跟技術(shù)人員溝通的，由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的,，重發(fā),。

2) 細(xì)胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況

a)客戶操作造成細(xì)胞污染,，不重發(fā),；

b)客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā),；

c)非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,，不重發(fā)；

d)細(xì)胞狀態(tài)不好,，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3 天的細(xì)胞狀態(tài)照片,，不重發(fā)；

e)細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā),；

f)收到細(xì)胞并發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于7 天的,，不重發(fā)；

g)視具體情況而定

五,、注意事項

1.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù),，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2.建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套,、衣服和戴上防護(hù)面罩,。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮,。解凍時,，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害,。

3.該細(xì)胞僅供科研使用,！說明書僅供參考以實際到貨說明書為準(zhǔn)！

僅用于科研,，不能用于臨床診斷,！所有產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于人或動物的治療等任何其他用途,，不為任何個人提供產(chǎn)品和服務(wù),。以實際收貨產(chǎn)品說明書為準(zhǔn)，網(wǎng)站說明書僅供參考,。