WERI-Rb-1-LUC-EGFP細胞

二,、細胞接收后的處理

1) 收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于室溫放置約1h,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們,。

2) 離心管直接在1000RPM條件下離心5min,，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細胞后,，根據(jù)離心后的沉淀量進行傳代,，轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶中后，請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),，同時給剛收到的細胞拍照（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù),。

3) 懸浮細胞：傳代時使用【半換液法】對細胞狀態(tài)有利,，因此我?guī)旖ㄗh您使用【半換液法】進行傳代，剛收到細胞時建議1:2傳代較為合適,。

4) 備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞,，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 ,。

三,、細胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入到含8mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心5min,，棄去上清液,，培養(yǎng)基重懸細胞,。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度,。

2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。

【半換液法】

懸浮狀態(tài)下生長的細胞,，可以通過向培養(yǎng)瓶中添加培養(yǎng)基來維持細胞的生長狀態(tài),，一般情況下細胞密度維持在1×10⁵~1×10⁶個/mL（不同細胞對密度要求不同，）可以維持細胞的正常生長,。

【離心換液法】

如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中1000rpm,，離心5min，棄去上清,，補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中,，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行,。

3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例,；

a) 收集細胞及細胞培養(yǎng)液,，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min,，棄去上清液,，用PBS清洗一遍，棄盡PBS,，進行細胞計數(shù),。

b) 根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度1×10^6~1×10^7/mL,，輕輕混勻,，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識,。

c) 將凍存管放入-80℃冰箱,，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

四,、培養(yǎng)注意事項

1) 細胞出現(xiàn)問題，予以重發(fā)情況

a) 細胞運輸途中遭遇的各種問題,，細胞丟失,、瓶身破損,、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā),；

b) 細胞污染問題,，請在收到產(chǎn)品3 天內(nèi)，給我們提出真實的實驗結(jié)果,，核實后重發(fā),；

c) 常溫發(fā)貨的細胞靜置2小時后，干冰凍存發(fā)貨的細胞復(fù)蘇后2 天后,，絕大多數(shù)細胞未存活,，（需提供真實清晰的細胞狀態(tài)照片），重發(fā),；

d) 干冰凍存發(fā)貨的細胞復(fù)蘇后2天后或常溫發(fā)貨的細胞靜置2 小時候并且未開封,，出現(xiàn)污染，重發(fā),；

e) 細胞活性問題,，請在收到產(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,，和每天的細胞照片,，核實后予重發(fā)；

f) 細胞收到當天以及第2,3 天請拍照,，3 天未告知的,，視為產(chǎn)品合格。4-7 天內(nèi)出現(xiàn)問題需提供收到細胞前3天照片和細胞出現(xiàn)問題的照片以及細胞相關(guān)操作的詳細步驟,，并跟技術(shù)人員溝通的,，由技術(shù)人員判定為我方責任的，重發(fā),。

2) 細胞出現(xiàn)問題,，不予以重發(fā)的情況

a) 客戶操作造成細胞污染，不重發(fā),；

b) 客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好,，不重發(fā)；

c) 非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,，不重發(fā),；

d) 細胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3 天的細胞狀態(tài)照片,，不重發(fā),；

e) 細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)；

f) 收到細胞并發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于7 天的,，不重發(fā),；

g) 視具體情況而定

五、注意事項

1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細胞時始終使用防護手套,、衣服和戴上防護面罩,。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏,，并會慢慢充滿液氮。解凍時,，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子,，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。

3. 該細胞僅供科研使用,！說明書僅供參考以實際到貨說明書為準,！

僅用于科研，不能用于臨床診斷,！所有產(chǎn)品僅供科研使用,，不得用于人或動物的治療等任何其他用途，不為任何個人提供產(chǎn)品和服務(wù),。以實際收貨產(chǎn)品說明書為準,，網(wǎng)站說明書僅供參考。