共價(jià)結(jié)合型果膠(CSP)含量試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

果膠是構(gòu)成細(xì)胞初生壁和中膠層的主要成分,，主要由原果膠、果膠酸甲酯和果膠酸組成,。果膠中含有半乳糖醛酸,、乳糖、阿拉伯糖,、葡萄糖醛酸等,，是許多高等植物細(xì)胞壁中含量zui豐富的多糖成分，其du特的物理,、化學(xué)性質(zhì)影響著植物源食品的口感和品質(zhì),。果膠間以 Ca2+橋及其他離子鍵、氫鍵,、糖苷鍵,、酯鍵和苯環(huán)偶聯(lián)的方式交聯(lián),，通過不同的抽提方法可以提取各種形式的果膠，如水溶性果膠（WSP）,、離子結(jié)合型果膠（ISP）和共價(jià)結(jié)合果膠（CSP）,。

測(cè)定原理：

利用帶有螯合劑的堿溶液提取共價(jià)結(jié)合型果膠（CSP），采用咔唑比色法測(cè)定果膠含量,。果膠水解成半乳糖醛酸,，在硫酸溶液中與咔唑試劑進(jìn)行縮合反應(yīng)，生成物質(zhì)在 530 nm 處有最大吸收峰,。

共價(jià)結(jié)合型果膠(CSP)含量試劑盒 糖原系列

試劑的組成和配制：

自備儀器和用品：

可見分光光度計(jì),、水浴鍋、可調(diào)式移液器,、1ml 玻璃比色皿,、80％乙醇、丙酮,、濃硫酸（不允許快遞）,、研缽和蒸餾水。

樣品的前處理：

1,、細(xì)胞壁的提?。喝〖s 0.3g 樣本，加入 1ml 80％乙醇,，室溫快速勻漿,，95℃水浴 20min，冷卻至室溫,，4000g 25℃離心 10min,，棄上清。沉淀加入 1.5ml80％乙醇和丙酮各洗一遍（渦旋振蕩 2min 左右,，4000g 25℃離心 10min,，棄上清即可），沉淀即為粗細(xì)胞壁,，加入 1ml 試劑一（去除淀粉）浸泡 15 小時(shí),，4000g

25℃離心 10min，棄上清,，將沉淀干燥,，稱重得細(xì)胞壁物質(zhì)（CWM）。

2,、CSP 的提?。悍Q取烘干的CWM 3mg，加入 1ml 試劑二，充分勻漿(若烘干物質(zhì)質(zhì)地堅(jiān)硬,，可先研碎后再加入 1ml 試劑二勻漿,，或者用勻漿器勻漿)。8000g 4℃離心 10min,，取上清液待測(cè)

測(cè)定步驟：

1,、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,，調(diào)節(jié)波長至 530nm 處,，蒸餾水調(diào)零；試劑三和試劑四 37℃預(yù)熱 10min 以上,。

2,、操作表

混勻

混勻 95℃水浴 5min 后，530nm 處讀取吸光值,，空白管,、標(biāo)準(zhǔn)管、對(duì)照管和測(cè)定管吸光值分別記為 A1,、 A2,、A3 和A4。若A 大于 2,，需將待測(cè)樣本用蒸餾水稀釋（可稀釋 10 倍或 20 倍）,。空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只要做一管,，每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管,。

注意事項(xiàng)：

zui低檢測(cè)限為 50μg /g 干重

CSP 含量計(jì)算：

（CSP 含量(mg /g 干重)= (C 標(biāo)準(zhǔn)×V1) ×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2) ×稀釋倍數(shù)

=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷W×稀釋倍數(shù)

C 標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.05mg/ml,；V1：加入樣本體積,，0.1ml；V2：加入提取液體積,，1ml,； W：樣本干重，g,。

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