可溶性果膠(WSP)含量試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

果膠是構(gòu)成細(xì)胞初生壁和中膠層的主要成分,，主要由原果膠,、果膠酸甲酯和果膠酸組成。果膠中含有半乳糖醛酸,、乳糖,、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等,，是許多高等植物細(xì)胞壁中含量zui豐富的多糖成分,，其du特的物理,、化學(xué)性質(zhì)影響著植物源食品的口感和品質(zhì)。果膠間以Ca²⁺橋及其他離子鍵,、氫鍵,、糖苷鍵、酯鍵和苯環(huán)偶聯(lián)的方式交聯(lián),，通過不同的抽提方法可以提取各種形式的果膠,，如水溶性果膠（WSP）、離子結(jié)合型果膠（ISP）和共價(jià)結(jié)合果膠（CSP）,。

測定原理：

利用酸溶液提取得到（WSP）可溶性果膠,，采用咔唑比色法測定果膠含量。果膠水解成半乳糖醛酸,，在硫酸溶液中與咔唑試劑進(jìn)行縮合反應(yīng),，生成物質(zhì)在 530 nm 處有最大吸收峰。

可溶性果膠(WSP)含量試劑盒   糖原系列

試劑的組成和配制：

自備儀器和用品：

可見分光光度計(jì),、水浴鍋,、可調(diào)式移液器、1ml 玻璃比色皿,、80％乙醇,、丙酮、濃硫酸（不允許快遞）,、研缽和蒸餾水,。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

樣品的前處理：

1、細(xì)胞壁的提?。喝〖s 0.3g 樣本,，加入 1ml 80％乙醇，室溫快速勻漿,，95℃水浴 20min,，冷卻至室溫，4000g 25℃離心 10min,，棄上清,。沉淀加入 1.5ml80％乙醇和丙酮各洗一遍（渦旋振蕩 2min 左右，4000g 25℃離心 10min,，棄上清即可）,，沉淀即為粗細(xì)胞壁，加入 1ml 試劑一（去除淀粉）浸泡 15 小時(shí),，4000g

25℃離心 10min,，棄上清，將沉淀干燥，稱重得細(xì)胞壁物質(zhì)（CWM）,。

2,、WSP 的提取：稱取烘干的CWM 3mg,，加入 1ml 試劑二,，充分勻漿(若烘干物質(zhì)質(zhì)地堅(jiān)硬，可先研碎后再加入 1ml 試劑二勻漿,，或者用勻漿器勻漿),。8000g 4℃離心 10min，取上清液待測

測定步驟：

1,、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,，調(diào)節(jié)波長至 530nm 處，蒸餾水調(diào)零,；試劑三和試劑四 37℃預(yù)熱 10min以上,。

2、加樣表

混勻

混勻 95℃水浴 5min 后,，530nm 處讀取吸光值,，空白管、標(biāo)準(zhǔn)管,、對(duì)照管和測定管吸光值分別記為 A1,、 A2、A3 和A4,。若A 大于 2,，需將待測樣本用蒸餾水稀釋（可稀釋 10 倍或 20 倍）?？瞻坠芎蜆?biāo)準(zhǔn)管只要做一管，每個(gè)測定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管,。

注意事項(xiàng)：

zui低檢測限為 50μg /g 干重

WSP 含量計(jì)算：

WSP 含量(mg /g 干重)= (C 標(biāo)準(zhǔn)×V1) ×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2) ×稀釋倍數(shù)

=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷W×稀釋倍數(shù)

C 標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)管濃度,，0.05mg/ml；V1：加入樣本體積,，0.1ml,；V2：加入提取液體積，1ml,； W：樣本干重,，g。

可溶性果膠(WSP)含量試劑盒   糖原系列