糖原磷酸化酶 a（Glycogen phosphorylase a，GPa）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

糖原磷酸化酶（Glycogen phosphorylase,，GP,，EC 2.4.1.1)）是糖原分解代謝的關(guān)鍵酶，使糖原分子從非還原端逐個斷開α-1，4-糖苷鍵移去葡萄糖基,，釋放 1-磷酸葡萄糖,，直至臨近糖原分子α-1，6-糖苷鍵分支點前 4 個葡萄糖基處,。GP 分為有活性的糖原磷酸化酶 a（GPa）和無活性的糖原磷酸化酶 b（GPb）兩種形式,。糖原的分解主要在 GPa 的催化下進行。

測定原理：

未添加激活劑時,，GPa 催化糖原和無機磷產(chǎn)生葡萄糖殘基生成糖原和 1-磷酸葡萄糖,，磷酸葡萄糖變位酶和 6-磷酸葡萄糖脫氫酶進一步依次催化 NADP 還原生成NADPH，在 340nm 下測定NADPH 上升速率,，即可反映GPa 活性,。

糖原磷酸化酶a試劑盒   糖原系列-常備現(xiàn)貨

組成：

自備儀器和用品：

紫外分光光度計、臺式離心機,、可調(diào)式移液器,、1 ml 石英比色皿、研缽,、冰和蒸餾水,。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

樣本的前處理：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液）,，進行冰浴勻漿,。8000g 4℃離心 10min，取上清,，置冰上待測,。

測定步驟：

1、分光光度計預(yù)熱 30min 以上,，調(diào)節(jié)波長至 340nm,，蒸餾水調(diào)零；

2,、工作液的配制：臨用前將試劑二轉(zhuǎn)移到試劑一中混合溶解待用,；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融,。

3,、試劑三的配制：臨用前在試劑三瓶中加入 2.5ml 蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存,，禁止反復(fù)凍融,。

4,、試劑四的配制：臨用前在試劑四瓶中加入 2.5ml 蒸餾水充分溶解待用,；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融,。

5,、將工作液,、試劑三和試劑四置于 37℃預(yù)熱 5 分鐘；

6,、在 1ml 石英比色皿中加入 50μl 樣本,、50μl 試劑三、50μl 試劑四,、50μl 蒸餾水和 800μl 工作液,，立即混勻，記錄 340nm 處 5min 后的A1 和 10min 后的吸光值A2,，計算ΔA=A2-A1,。

GPa 活性計算：

（1） 按樣本蛋白濃度計算

單位定義：每mg 組織蛋白每分鐘產(chǎn)生 1nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。

GPa（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計算

單位定義：每g 組織每分鐘產(chǎn)生 1nmol NADPH 定義為一個酶活力單位,。

GPa（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(W ×V 樣÷V 樣總)÷T=643×ΔA÷W

V 反總：反應(yīng)體系總體積,，1×10^-3 L；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù),，6.22×10³ L / mol /cm,；d：比色皿光徑， 1cm,；V 樣：加入樣本體積,，0.05 ml；V 樣總：加入提取液體積,，1 ml,；T：反應(yīng)時間，5 min,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/ml；W：樣本質(zhì)量,，g,。

糖原磷酸化酶a試劑盒   糖原系列-常備現(xiàn)貨