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軟瓊脂(softagar)實(shí)驗(yàn)一般用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞的集落形成能力?，F(xiàn)在這種方法越來(lái)越多的用于分離癌細(xì)胞，也可以用來(lái)確認(rèn)癌細(xì)胞是否具有癌化特性，為進(jìn)一步做腫瘤小鼠移植模型奠定理論基礎(chǔ)。該方法看似簡(jiǎn)單，但如果細(xì)節(jié)掌握不好,，往往導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或數(shù)據(jù)缺乏說(shuō)服力。如果你曾經(jīng)在這個(gè)實(shí)驗(yàn)上栽了跟頭,，請(qǐng)不妨在如下幾個(gè)方面進(jìn)行嘗試：1.要確保在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所使用的瓊脂處于*液體狀態(tài)（80℃）,，尤其是在做基底時(shí)，如果瓊脂凝固過(guò)快會(huì)導(dǎo)致基底不均一,；2.做瓊脂基底是應(yīng)避免產(chǎn)生小氣泡,，一旦有小氣泡產(chǎn)生，應(yīng)該立即將氣泡趕走,；3
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剛復(fù)蘇的細(xì)胞狀態(tài)不好,，有許多死細(xì)胞，頻繁換液好嗎,？大致如題,，有一些人認(rèn)為細(xì)胞剛復(fù)蘇不能狗頻繁的換液，說(shuō)是細(xì)胞會(huì)自己分泌細(xì)胞因子維持自己的生存,，換液的話,，就會(huì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng)，長(zhǎng)的不好,，但是我的細(xì)胞狀態(tài)不好而且有很多細(xì)胞碎片,，細(xì)胞死亡之后在培養(yǎng)基中會(huì)不會(huì)釋放很多的有毒物質(zhì)，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)不利,，所以就想要換液把死細(xì)胞和細(xì)胞碎片都洗掉,，目前不知道怎么選擇，所以想請(qǐng)大家給一下就參考意見(jiàn),？能洗掉的就洗,，洗不掉的也不用刻意的用力吹，正如你所說(shuō)的細(xì)胞密度小,，可能會(huì)損害細(xì)胞,。換液的話還是2~3天換,，不要每天都換液,。
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細(xì)胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)版知識(shí)（供參考）
基礎(chǔ)篇-無(wú)菌操作基本技術(shù)1.實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，無(wú)菌室及無(wú)菌操作臺(tái)(laminarflow)以紫外燈照射30-60分鐘滅菌，以70%ethanol擦拭無(wú)菌操作抬面,，并開(kāi)啟無(wú)菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘后,，才開(kāi)始實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只處理一株細(xì)胞株,，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基,，以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后,，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái),，以70%ethanol擦拭無(wú)菌操作抬面。操作間隔應(yīng)讓無(wú)菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘以上后,，再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株之操作,。2.無(wú)菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品,，例如試管架,、吸管 -
近看到不少問(wèn)有關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)污染的事，正好我看到了一個(gè)有關(guān)這方面的總結(jié),，很全很好很強(qiáng)大,，跟大家分享下細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的污染情況總結(jié)如下:常見(jiàn)的污染如下：1、細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀,，根據(jù)感染細(xì)菌的不同,，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃,，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯,。仔細(xì)檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時(shí)放氣時(shí)間足夠,，壓力足夠,！尤其是和儲(chǔ)存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲(chǔ)存液污染,，一定要注意,！下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象！可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理
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1,、熒光免疫測(cè)定技術(shù)的概念：將試劑抗原或試劑抗體用熒光素進(jìn)行標(biāo)記,，試劑與標(biāo)本中相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng)后，測(cè)定復(fù)合物中的熒光素,，這種免疫技術(shù),，稱為免疫熒光素技術(shù)。2,、熒光的產(chǎn)生：物質(zhì)吸收外界能量而進(jìn)入激發(fā)狀態(tài),，在回復(fù)基態(tài)時(shí)多余的能量以電磁輻射的形式釋放,，即發(fā)光，這種光稱為熒光,。這種物質(zhì),，稱為熒光素。由光激發(fā)所引起的熒光,，為光致熒光------熒光免疫技術(shù)由化學(xué)反應(yīng)所引起的熒光,，為化學(xué)熒光------化學(xué)發(fā)光技術(shù)3、熒光素的熒光特性：⑴停止供能,，熒光現(xiàn)象隨即終止⑵對(duì)光的吸收和熒光的發(fā)射具高度選擇性,綠
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一般我們購(gòu)買(mǎi)商品化的primaryantibody的時(shí)候,，抗體的說(shuō)明書(shū)中都會(huì)給我們一個(gè)推薦的抗體使用濃度。這個(gè)濃度在一定程度上來(lái)說(shuō),，是過(guò)飽和的,，可以滿足大多數(shù)實(shí)驗(yàn)的染色需求。但是因?yàn)槭沁^(guò)飽和的濃度,，這就帶來(lái)了一定程度的抗體浪費(fèi),。而過(guò)量的抗體，也會(huì)大大提高樣本的自發(fā)熒光,。從另一個(gè)角度來(lái)看,，因?yàn)閺S家給出的推薦濃度都是基于一個(gè)特定的樣本濃度和樣本體積，所以在一些特殊的實(shí)驗(yàn)中,，比如樣本濃度或樣本體積過(guò)大的實(shí)驗(yàn),，推薦的濃度就無(wú)法達(dá)到飽和滴加的要求。在這樣的前提下,，推薦實(shí)驗(yàn)用戶針對(duì)自己的實(shí)驗(yàn)要求,，zui好可
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1.實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，無(wú)菌室及無(wú)菌操作臺(tái)(laminarflow)以紫外燈照射30-60分鐘滅菌,，以70%ethanol擦拭無(wú)菌操作抬面,，并開(kāi)啟無(wú)菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘后，才開(kāi)始實(shí)驗(yàn)操作,。每次操作只處理一株細(xì)胞株,，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基，以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染,。實(shí)驗(yàn)完畢后,，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái)，以70%ethanol擦拭無(wú)菌操作抬面,。操作間隔應(yīng)讓無(wú)菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘以上后,，再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株之操作。2.無(wú)菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞,，必要物品,，例如試管架,、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時(shí)
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MEM細(xì)胞培養(yǎng)基細(xì)胞培養(yǎng)是實(shí)驗(yàn)室里常見(jiàn)和基本的實(shí)驗(yàn)了，但卻不是簡(jiǎn)單的,。別小看細(xì)胞培養(yǎng),，這里可蘊(yùn)含著大學(xué)問(wèn),。有時(shí)候細(xì)胞狀態(tài)不好,，轉(zhuǎn)染、藥篩這些實(shí)驗(yàn)根本就沒(méi)辦法做,。影響細(xì)胞培養(yǎng)的因素很多,，讓我們先從培養(yǎng)基和血清說(shuō)起。經(jīng)典的培養(yǎng)基有很多種,，Invitrogen(GIBCO),、ThermoFisher(HyClone)、Sigma等公司都可以提供,。其中DMEM,、RPMI1640、MEM,、DMEM/F12都是應(yīng)用廣泛的培養(yǎng)基,。其他如M199、IMDM,、L15培養(yǎng)基等也用于某些細(xì)胞的培養(yǎng),。◆MEM是由Eag
