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Ⅲ型前膠原（PCⅢ）ELISA 試劑盒

酶標(biāo)抗體標(biāo)記效果測定：測定內(nèi)容包括酶和抗體活性,、結(jié)合物中酶含量和IgG含量,、酶與IgG摩爾比值以及結(jié)合率。

Ⅲ型前膠原（PCⅢ）ELISA 試劑盒

間接法

間接法常用于檢測抗體,，一般的操作步驟為：

1. 將已知的抗原固著于塑膠孔盤上,，完成后洗去多余的抗原。

2. 加入待測檢體,，檢體中若含有待測的一次抗體,，則其會與塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結(jié)。

3. 洗去多余待測檢體,，加入帶有酶的二次抗體,，與待測的一次抗體鍵結(jié)。

4. 洗去多余未鍵結(jié)二次抗體，加入酶底物使酶呈色,，藉儀器（ELISA reader）測定塑膠盤中的吸光值（OD值）,，以評估有色終產(chǎn)物的含量即可測量待測抗體的含量。

操作程序

1.   分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）,、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl；在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外,。輕輕晃動混勻,，37℃溫育60分鐘。

2.   棄去液體,，甩干,，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次,，拍干,。

3.   每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

4.   取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。

5.   測定：以空白孔調(diào)零，在450nm波長下測量各孔的吸光度值（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。

6.   根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度,。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算,。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的，其實際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù),。