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皮質(zhì)酮（CORT）ELISA 試劑盒

酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定法,，簡(jiǎn)稱酶聯(lián)免疫法，或者ELISA法,。

它的中心就是讓抗體與酶復(fù)合物結(jié)合,，然后通過(guò)顯色來(lái)檢測(cè)。

皮質(zhì)酮（CORT）ELISA 試劑盒

操作程序

1.   分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）,、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl,；在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外。輕輕晃動(dòng)混勻,，37℃溫育60分鐘,。

2.   棄去液體，甩干,，每孔加滿稀釋后洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。如此重復(fù)5次，拍干,。

3.   每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

4.   取出酶標(biāo)板,，每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。

5.   測(cè)定：以空白孔調(diào)零，在450nm波長(zhǎng)下測(cè)量各孔的吸光度值（OD值）,。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

6.   根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度,。也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算,。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的，其實(shí)際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù),。

1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定（enzyme linked immunosorbent assay,，ELISA）用于IgG定量測(cè)定的文章，使得1966年開(kāi)始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測(cè)定方法。這一方法的基本原理是：①使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面,，并保持其免疫活性,。②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性,，又保留酶的活性,。在測(cè)定時(shí)，把受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng),。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開(kāi),，后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物,，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺有無(wú)定性或定量分析,。由于酶的催化效率很高,，故可極大地放大反應(yīng)效果，從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度,。